Modifications to the C-terminus of Arf1 alter cell functions and protein interactions.
Modifications to the C-terminus of Arf1 alter cell functions and protein interactions.
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DOI：
10.1111/j.1600-0854.2010.01054.x
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发表时间：
2010-06
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kahn RA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Jian X;Cavenagh M;Gruschus JM;Randazzo PA;Kahn RA
Arf 家族蛋白是 ≈21 kDa GTP 结合蛋白，是膜运输和肌动蛋白细胞骨架的关键调节因子。研究 Arf 作用的复杂信号通路依赖于由 Arf 与表位标签融合的重组蛋白或谷胱甘肽-S-转移酶或绿色荧光蛋白等蛋白质组成的重组蛋白，用于基于细胞的哺乳动物细胞研究和细菌表达的重组蛋白用于生化测定。然而，这种蛋白质融合对与细胞功能相关的生化特性的影响最多只得到了不完整的研究。在这里，我们描述了 Arf1 C 端标签对 (i) 酿酒酵母功能、(ii) 体外核苷酸交换以及 (iii) 与鸟嘌呤核苷酸交换因子和 GTP 酶激活蛋白相互作用的影响。我们发现，与野生型蛋白相比，标记的 Arf 在每次测定中都受到显着损害或改变，并且这些变化肯定会改变细胞中的作用。我们讨论了与使用这些试剂解释实验相关的结果，并建议作者和编辑一致采用一些简单的规则来描述和讨论使用 Arf 家族成员获得的结果，这些结果可以很容易地应用于其他蛋白质。
Arf family proteins are ≈21 kDa GTP-binding proteins that are critical regulators of membrane traffic and the actin cytoskeleton. Studies examining the complex signaling pathways underlying Arf action have relied on recombinant proteins comprised of Arf fused to epitope tags or proteins such as glutathione-S-transferase or green fluorescent protein for both cell-based mammalian cell studies and bacterially expressed recombinant proteins for biochemical assay. However, the effects of such protein fusions on the biochemical properties relevant to the cellular function have been only incompletely studied at best. Here, we have characterized the effect of C-terminal tagging of Arf1 on (i) function in S. cerevisiae, (ii) in vitro nucleotide exchange, and (iii) interaction with guanine nucleotide exchange factors and GTPase-activating proteins. We found that the tagged Arfs were substantially impaired or altered in each assay, compared to the wild type protein, and these changes are certain to alter actions in cells. We discuss the results related to the interpretation of experiments using these reagents and we propose that authors and editors consistently adopt a few simple rules for describing and discussing results obtained with Arf family members that can be readily applied to other proteins.
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DOI：
10.1083/jcb.200806041
发表时间：
2008-09-22
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Kahn RA;Bruford E;Inoue H;Logsdon JM Jr;Nie Z;Premont RT;Randazzo PA;Satake M;Theibert AB;Zapp ML;Cassel D
通讯作者：
Cassel D
影响因子：
6.8
作者：
Bickford, LC;Mossessova, E;Goldberg, J
通讯作者：
Goldberg, J
影响因子：
4.8
作者：
Cavenagh, MM;Whitney, JA;Kahn, RA
通讯作者：
Kahn, RA
DOI：
10.1016/j.str.2008.10.020
发表时间：
2009-01-14
期刊：
Structure (London, England : 1993)
影响因子：
--
作者：
Liu Y;Kahn RA;Prestegard JH
通讯作者：
Prestegard JH
影响因子：
64.8
作者：
AMOR, JC;HARRISON, DH;RINGE, D
通讯作者：
RINGE, D