Morphological control enables nanometer-scale dissection of cell-cell signaling complexes.
Morphological control enables nanometer-scale dissection of cell-cell signaling complexes.
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DOI：
10.1038/s41467-022-35409-9
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发表时间：
2022-12-20
影响因子：
16.6
通讯作者：
Hanein, Dorit
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dow, Liam P.;Gaietta, Guido;Kaufman, Yair;Swift, Mark F.;Lemos, Moara;Lane, Kerry;Hopcroft, Matthew;Bezault, Armel;Sauvanet, Cecile;Volkmann, Niels;Pruitt, Beth L.;Hanein, Dorit
蛋白质微图案化使得能够稳健地控制细胞在用于低温电子断层扫描（cryo-ET）的电子显微镜基底上的定位。然而，调控细胞边界和底层电子显微镜基板（EM网格）的组合提供了一个知之甚少的细胞生物学微环境。由于基板刚度和形态影响细胞的行为，我们设计的协议，以表征纳米级的细节的蛋白质微图案EM网格结合冷冻ET，原子力显微镜，扫描电子显微镜。测量多孔碳EM网格的力-位移特性，我们发现它们的有效弹簧常数与皮肤组织的预期生理值相似。尽管它们在光学显微镜分辨率下明显平滑，但蛋白质微图案的空间边界在纳米尺度上是不规则的。我们的蛋白质微图案化工作流程提供了控制细胞双联体定位和形态的方法，以确定点状粘附连接的纳米细节。我们的工作流程是研究控制细胞-细胞信号传导的基本结构变化的基础。电子显微镜网格上的微图案化使得能够控制细胞定位和排列。在这里，作者描述了通过冷冻ET进行可重复分子表征的微图案化工作流程的详细纳米级表征
Protein micropatterning enables robust control of cell positioning on electron-microscopy substrates for cryogenic electron tomography (cryo-ET). However, the combination of regulated cell boundaries and the underlying electron-microscopy substrate (EM-grids) provides a poorly understood microenvironment for cell biology. Because substrate stiffness and morphology affect cellular behavior, we devised protocols to characterize the nanometer-scale details of the protein micropatterns on EM-grids by combining cryo-ET, atomic force microscopy, and scanning electron microscopy. Measuring force displacement characteristics of holey carbon EM-grids, we found that their effective spring constant is similar to physiological values expected from skin tissues. Despite their apparent smoothness at light-microscopy resolution, spatial boundaries of the protein micropatterns are irregular at nanometer scale. Our protein micropatterning workflow provides the means to steer both positioning and morphology of cell doublets to determine nanometer details of punctate adherens junctions. Our workflow serves as the foundation for studying the fundamental structural changes governing cell-cell signaling. Micropatterning on electron microscopy grids enables control of cell positioning and arrangement. Here, the authors describe detailed nanoscale characterization of a micropatterning workflow for reproducible molecular characterization through cryo-ET
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影响因子：
3
作者：
Anderson, Karen L.;Page, Christopher;Volkmann, Niels
通讯作者：
Volkmann, Niels
DOI：
10.1073/pnas.1701703114
发表时间：
2017-07-18
影响因子：
11.1
作者：
Hart, Kevin C.;Tan, Jiongyi;Gloerich, Martijn
通讯作者：
Gloerich, Martijn
影响因子：
4
作者：
Huveneers, Stephan;de Rooij, Johan
通讯作者：
de Rooij, Johan
影响因子：
3
作者：
Kremer, JR;Mastronarde, DN;McIntosh, JR
通讯作者：
McIntosh, JR
影响因子：
8.8
作者：
Indra, Indrajyoti;Troyanovsky, Regina B.;Troyanovsky, Sergey M.
通讯作者：
Troyanovsky, Sergey M.