Generation and Characterization of a Tissue-Specific Centrosome Indicator Mouse Line.
Generation and Characterization of a Tissue-Specific Centrosome Indicator Mouse Line.
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DOI：
10.1002/dvg.22937
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发表时间：
2016-05
期刊：
影响因子：
1.5
通讯作者：
Evans, Sylvia M.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hirai, Maretoshi;Chen, Ju;Evans, Sylvia M.
中心体是细胞分裂过程中染色体分离的主要微管组织中心。中心体为微管提供稳定的锚，构成有丝分裂细胞中纺锤极的中心，并决定细胞分裂的方向。然而，可视化的中心体是具有挑战性的，因为它们的尺寸小。特别是在小鼠组织中，在多种混合细胞类型中观察属于特定感兴趣细胞类型的中心体是极具挑战性的。为了克服这一障碍，我们产生了组织特异性中心体指示剂。在该小鼠系中，将含有具有一式三份polyA序列的floxed新肌球蛋白抗性基因的构建体敲入Rosa基因座中，随后是EGFP-Centrin 1融合盒。在Cre介导的切除后，EGFP-Centrin 1在Rosa基因座的控制下表达。利用小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）的实验证明了真实的-时间成像的可行性，并表明EGFP-Centrin 1表达反映了内源性中心体周期，在细胞周期中精确地经历了一轮复制。此外，使用胚胎和成年小鼠组织的实验表明，EGFP-Centrin 1特异性地反映了内源性中心体的定位。创世纪54：286-296，2016。版权所有2016作者.出版社：Wiley Periodicals，Inc.
Centrosomes are major microtubule organizing centers (MTOCs) that play an important role in chromosome segregation during cell division. Centrosomes provide a stable anchor for microtubules, constituting the centers of the spindle poles in mitotic cells, and determining the orientation of cell division. However, visualization of centrosomes is challenging because of their small size. Especially in mouse tissues, it has been extremely challenging to observe centrosomes belonging to a specific cell type of interest among multiple comingled cell types. To overcome this obstacle, we generated a tissue‐specific centrosome indicator. In this mouse line, a construct containing a floxed neomyocin resistance gene with a triplicate polyA sequence followed by an EGFP‐Centrin1 fusion cassette was knocked into the Rosa locus. Upon Cre‐mediated excision, EGFP‐Centrin1 was expressed under the control of the Rosa locus. Experiments utilizing mouse embryo fibroblasts (MEFs) demonstrated the feasibility of real‐time imaging, and showed that EGFP‐Centrin1 expression mirrored the endogenous centrosome cycle, undergoing precisely one round of duplication through the cell cycle. Moreover, experiments using embryo and adult mouse tissues demonstrated that EGFP‐Centrin1 specifically mirrors the localization of endogenous centrosomes. genesis 54:286–296, 2016. © 2016 The Authors. Genesis Published by Wiley Periodicals, Inc.
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DOI：
10.1073/pnas.94.26.14602
发表时间：
1997-12-23
影响因子：
11.1
作者：
O'Gorman, S;Dagenais, NA;Marchuk, Y
通讯作者：
Marchuk, Y
DOI：
10.1083/jcb.200910001
发表时间：
2010-03-08
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Sütterlin C;Colanzi A
通讯作者：
Colanzi A
影响因子：
10.5
作者：
Jiao, K;Kulessa, H;Hogan, BLM
通讯作者：
Hogan, BLM
DOI：
10.1002/gene.10022
发表时间：
2001-12-01
期刊：
Genesis The Journal of Genetics and Development
影响因子：
--
作者：
Moses, Kelvin A.;DeMayo, Franco;Schwartz, Robert J.
通讯作者：
Schwartz, Robert J.
影响因子：
--
作者：
Srinivas S;Watanabe T;Lin CS;William CM;Tanabe Y;Jessell TM;Costantini F
通讯作者：
Costantini F