Live-Cell Imaging of Drosophila melanogaster Third Instar Larval Brains.
Live-Cell Imaging of Drosophila melanogaster Third Instar Larval Brains.
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DOI：
10.3791/65538
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发表时间：
2023-06-23
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Cabernard C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Segura RC;Cabernard C
果蝇神经干细胞（神经母细胞，以下简称NBs）进行不对称分裂，再生自我更新的神经母细胞，同时形成分化神经节母细胞（GMC）， GMC将再进行一次分裂，产生两个神经元或胶质细胞。对神经干细胞的研究揭示了细胞极性、纺锤体取向、神经干细胞自我更新和分化的分子机制。这些不对称的细胞分裂很容易通过活细胞成像观察到，这使得幼虫NBs非常适合研究活组织中不对称细胞分裂的时空动态。当在营养补充的培养基中进行适当的解剖和成像时，外植体大脑中的NBs会在12-20小时内稳定分裂。先前描述的方法在技术上是困难的，对于该领域的新手来说可能是一个挑战。本文描述了一种使用脂肪体补充剂制备、解剖、安装和成像活体三龄幼虫脑外植体的方案。还讨论了潜在的问题，并提供了如何使用该技术的示例。在此，我们讨论了黑腹果蝇三龄幼虫活体外植体脑的制备、解剖、安装和成像的工作流程，以观察生理条件下的细胞和亚细胞动力学。
Drosophila neural stem cells (neuroblasts, NBs hereafter) undergo asymmetric divisions, regenerating the self-renewing neuroblast, while also forming a differentiating ganglion mother cell (GMC), which will undergo one additional division to give rise to two neurons or glia. Studies in NBs have uncovered the molecular mechanisms underlying cell polarity, spindle orientation, neural stem cell self-renewal, and differentiation. These asymmetric cell divisions are readily observable via live-cell imaging, making larval NBs ideally suited for investigating the spatiotemporal dynamics of asymmetric cell division in living tissue. When properly dissected and imaged in nutrient-supplemented medium, NBs in explant brains robustly divide for 12–20 h. Previously described methods are technically difficult and may be challenging to those new to the field. Here, a protocol is described for the preparation, dissection, mounting, and imaging of live third-instar larval brain explants using fat body supplements. Potential problems are also discussed, and examples are provided for how this technique can be used. Here, we discuss a workflow to prepare, dissect, mount, and image live explant brains from Drosophila melanogaster third instar larvae to observe the cellular and subcellular dynamics under physiological conditions.
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DOI：
10.1083/jcb.201503117
发表时间：
2015-07-06
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Lerit DA;Jordan HA;Poulton JS;Fagerstrom CJ;Galletta BJ;Peifer M;Rusan NM
通讯作者：
Rusan NM
DOI：
10.1007/978-3-319-53150-2_8
发表时间：
2017-01-01
期刊：
ASYMMETRIC CELL DIVISION IN DEVELOPMENT, DIFFERENTIATION AND CANCER
影响因子：
--
作者：
Gallaud, Emmanuel;Tri Pham;Cabernard, Clemens
通讯作者：
Cabernard, Clemens
影响因子：
8.8
作者：
Nair, Anjana Ramdas;Singh, Priyanka;Cabernard, Clemens
通讯作者：
Cabernard, Clemens
影响因子：
7.7
作者：
Oon, Chet Huan;Prehoda, Kenneth E.
通讯作者：
Prehoda, Kenneth E.
影响因子：
3.3
作者：
Connell M;Cabernard C;Ricketson D;Doe CQ;Prehoda KE
通讯作者：
Prehoda KE