Identification of a missense mutation in an adult-onset patient with glycogenosis type II expressing only one allele.
Identification of a missense mutation in an adult-onset patient with glycogenosis type II expressing only one allele.
复制标题
鉴定一名成年发病的仅表达一个等位基因的 II 型糖原增多症患者的错义突变。
DOI：
10.1089/dna.1991.10.681
复制
发表时间：
1991
影响因子：
3.1
通讯作者：
Hirschhorn,R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Martiniuk,F;Mehler,M;Bodkin,M;Tzall,S;Hirschhorn,K;Zhong,N;Hirschhorn,R
糖原贮藏病II型患者缺乏溶酶体酶- α -葡萄糖苷酶（GAA）或酸性麦芽糖酶。我们试图确定一名成人发病患者的疾病分子基础，这种疾病非常罕见，酶活性非常低，与婴儿发病形式相似，并且以前报道过磷酸化缺陷。我们从患者的细胞系（GM 1935）中构建cDNA和基因组DNA文库，并确定编码区的核苷酸序列。一个等位基因有3个碱基对的替换（c1935到A、g2446到A和c2780到T），都预测了氨基酸的变化（Asp-645到Glu、Val-816到Ile和Thr-927到Ile）。为了确定三种碱基对替换中哪一种导致酶活性丧失，我们接下来在sv40永活的gaa缺陷成纤维细胞系中使用引物定向诱变和瞬时基因表达。只有包含g2446到A突变（Val-816到Ile）的构建体失去了GAA酶活性，而其他两个取代（包括预测n -链糖基化和甘露糖磷酸化潜在位点丢失的Thr-927到Ile的变化）都导致酶活性与对照相同。基因组DNA的RFLPs分析以及三个碱基对改变的序列分析表明，该患者是一种遗传化合物。接下来，我们用aatii酶切pcr扩增的cDNA（从RNA逆转录）来检测1935碱基对的替换，发现几乎所有的mRNA都来自具有3个碱基对替换的等位基因。我们的研究结果首次鉴定了成人型糖原病患者的一个等位基因的疾病特异性突变。
The lysosomal enzyme acid alpha glucosidase (GAA) or acid maltase is deficient in glycogen storage disease type II. We sought to determine the molecular basis for the disease in an adult-onset patient, unusual for very low enzyme activity similar to that seen with the infantile-onset form and with a previously reported defect in phosphorylation. We constructed cDNA and genomic DNA libraries from the patient's cell line (GM 1935) and determined the nucleotide sequence of the coding region. There were three base-pair substitutions in one allele (C1935to A; G2446to A and C2780to T), all predicting amino acid changes (Asp-645 to Glu; Val-816 to Ile and Thr-927 to Ile). To determine which of the three base-pair substitutions resulted in loss of enzyme activity, we next utilized primer-directed mutagenesis and transient gene expression in an SV40-immortalized GAA-deficient fibroblast cell line. Only the construct containing the G2446to A mutation (Val-816 to Ile) lost GAA enzyme activity, while the other two substitutions (including the Thr-927 to Ile change that predicts a loss of a potential site for N-linked glycosylation and mannose phosphorylation) each resulted in enzyme activity equal to the control. Analysis of RFLPs in genomic DNA, as well as sequence analysis for the three base-pair alterations, indicated that the patient was a genetic compound. We next digested PCR-amplified cDNA (reverse-transcribed from RNA) withAatII to detect the base-pair 1935 substitution and found that virtually all of the mRNA was derived from the allele with the three base-pair substitutions. Our results provide the first identification of a disease-specific mutation in one allele of a patient with the adult onset form of glycogenosis type II.
登录
查看更多内容
人酸性α-葡萄糖苷酶的 cDNA 和 5 侧翼区域的序列、5 非翻译前导序列中内含子的检测、18 bp 多态性的定义以及与先前 cDNA 和氨基酸序列的差异。
影响因子：
3.1
作者：
Martiniuk,F;Mehler,M;Tzall,S;Meredith,G;Hirschhorn,R
通讯作者：
Hirschhorn,R
抗人酸性α-葡萄糖苷酶的单克隆抗体。
DOI：
10.1016/0304-4165(81)90041-6
发表时间：
1981
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
--
作者：
J. Hilkens;J. Tager;F. Buijs;B. Brouwer;G. van Thienen;F. P. Tegelaers;J. Hilgers
通讯作者：
J. Hilgers
影响因子：
2.9
作者：
BROWN, BI;BROWN, DH;JEFFREY, PL
通讯作者：
JEFFREY, PL
溶酶体酶和相关蛋白质的同源性：预测翻译后修饰位点，包括甘露糖的磷酸化以及己糖胺酶、α-葡萄糖苷酶、兔和人异麦芽糖酶的 α 和 β 亚基中的潜在表位和底物结合位点
DOI：
10.1002/prot.340040305
发表时间：
1988
期刊：
Proteins: Structure
影响因子：
--
作者：
Alison K. Barnes;C. Wynn
通讯作者：
C. Wynn
II 型糖原合成中酸性 α-葡萄糖苷酶的合成、磷酸化和成熟缺陷。
DOI：
10.1016/s0021-9258(17)39477-2
发表时间：
1985
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
A. Reuser;M. Kroos;R. Elferink;J. Tager
通讯作者：
J. Tager