Transcription of click-linked DNA in human cells.
Transcription of click-linked DNA in human cells.
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DOI：
10.1002/anie.201308691
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发表时间：
2014-02-24
影响因子：
16.6
通讯作者：
Tavassoli, Ali
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Birts, Charles N.;Sanzone, A. Pia;El-Sagheer, Afaf H.;Blaydes, Jeremy P.;Brown, Tom;Tavassoli, Ali
Click DNA连接有望成为当前酶法DNA组装的替代方法，最终目标是使用高效的化学反应进行基因和基因组的总化学合成和组装。这种方法将使各种化学修饰的碱基能够在DNA的长片段中结合，这是目前基于聚合酶的方法不可能实现的壮举。这种方法的一个明确要求是所得到的三氮唑连接的DNA的生物相容性。在这里，通过使用编码荧光蛋白mCherry的点击连接基因，证明了这种非自然DNA连接物在人类细胞中的正确功能。从这些细胞中分离出的mRNA的逆转录和随后的mCherry cDNA测序表明没有错误的转录。核苷酸切除修复(NER)通过使用NER缺陷的人类细胞系被证明在观察到的生物相容性中没有发挥作用。这是第一个非天然DNA连接子在真核细胞中发挥作用的例子。
Click DNA ligation promises an alternative to the current enzymatic approaches for DNA assembly, with the ultimate goal of using efficient chemical reactions for the total chemical synthesis and assembly of genes and genomes. Such an approach would enable the incorporation of various chemically modified bases throughout long stretches of DNA, a feat not possible with current polymerase-based methods. An unequivocal requirement for this approach is the biocompatibility of the resulting triazole-linked DNA. The correct function of this unnatural DNA linker in human cells is demonstrated here by using a click-linked gene encoding the fluorescent protein mCherry. Reverse transcription of mRNA isolated from these cells and subsequent sequencing of the mCherry cDNA shows error-free transcription. Nucleotide excision repair (NER) is shown to not play a role in the observed biocompatibility by using a NER-deficient human cell line. This is the first example of a non-natural DNA linker being functional in a eukaryotic cell.
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影响因子：
16.8
作者：
Camenisch, U;Dip, R;Naegeli, H
通讯作者：
Naegeli, H
影响因子：
16
作者：
Kettenberger, H;Armache, KJ;Cramer, P
通讯作者：
Cramer, P
影响因子：
3.6
作者：
Varizhuk, Anna M.;Kaluzhny, Dmitry N.;Florentiev, Vladimir L.
通讯作者：
Florentiev, Vladimir L.
DOI：
10.1073/pnas.77.7.3898
发表时间：
1980-01-01
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA-BIOLOGICAL SCIENCES
影响因子：
--
作者：
GLUZMAN, Y;SAMBROOK, JF;FRISQUE, RJ
通讯作者：
FRISQUE, RJ
影响因子：
4.3
作者：
Dallmann, Andre;El-Sagheer, Afaf H.;Brown, Tom
通讯作者：
Brown, Tom