Carbohydrate-Polypeptide Contacts in the Antibody Receptor CD16A Identified through Solution NMR Spectroscopy.
Carbohydrate-Polypeptide Contacts in the Antibody Receptor CD16A Identified through Solution NMR Spectroscopy.
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通过溶液核磁共振波谱鉴定抗体受体 CD16A 中的碳水化合物-多肽接触。
DOI：
10.1021/acs.biochem.7b00392
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Barb,AdamW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Subedi,GaneshP;Falconer,DanielJ;Barb,AdamW
天冬酰胺连接的碳水化合物(N-糖链)是真核蛋白质的常见修饰，具有多种性质，包括治疗性单抗的基本稳定性。在这里，我们提出了一种快速而有效的策略来识别与多肽残基接触的N-糖链，并应用该方法来分析与人抗体受体CD16A(Fcγ受体IIIA)连接的五个N-糖链。人胚胎肾293S细胞用标准蛋白表达技术和添加3g/L[13CU]葡萄糖的培养液，用13CU标记的N-糖链表达CD16A。由于每个N-糖链中只存在一个还原末端和氮键连接的残基，因此在糖链还原末端的蛋白质-林肯-乙酰氨基葡萄糖残基上的异构体共振特别适合于多糖基化N-糖蛋白的研究。在常规的二维异核单量子相干核磁共振(NMR)实验中，异构体1H1和13C1核在还原末端残基上的相关性产生串音，出现在没有其他碳水化合物峰或背景蛋白质信号的光谱区域。对应于N45和N162 N-糖链的两个N-糖链峰从对应于N38、N74和N169 N-糖链的快速平均峰中分散出来。我们使用核磁共振和1μS全原子计算模拟相结合的方法来确定N45N-糖链和CD16A多肽残基之间的意外接触。
Asparagine-linked carbohydrates (N-glycans) are common modifications of eukaryotic proteins that confer multiple properties, including the essential stabilization of therapeutic monoclonal antibodies. Here we present a rapid and efficient strategy for identifying N-glycans that contact polypeptide residues and apply the method to profile the five N-glycans attached to the human antibody receptor CD16A (Fc γ receptor IIIA). Human embryonic kidney 293S cells expressed CD16A with13CU-labeled N-glycans using standard protein expression techniques and medium supplemented with 3 g/L [13CU]glucose. Anomeric resonances on the protein-linkedN-acetylglucosamine residue at the reducing end of the glycan are particularly well suited to studies of multiply glycosylated N-glycoproteins because only one reducing end and nitrogen-linked residue is present in each N-glycan. Correlations between anomeric1H1 and13C1 nuclei on the reducing end residue generate crosspeaks in a conventional two-dimensional heteronuclear single-quantum coherence nuclear magnetic resonance (NMR) experiment that appear in a region of the spectrum devoid of other carbohydrate peaks or background protein signals. Two N-glycan peaks corresponding to the N45 and N162 N-glycans were dispersed from the rapidly averaged peaks corresponding to the N38, N74, and N169 N-glycans. We used a combination of NMR and 1 μs all-atom computational simulations to identify unexpected contacts between the N45 N-glycan and CD16A polypeptide residues.
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影响因子：
16.8
作者：
Johnson JL;Jones MB;Ryan SO;Cobb BA
通讯作者：
Cobb BA
DOI：
10.1016/j.str.2015.06.015
发表时间：
2015-09-01
期刊：
Structure (London, England : 1993)
影响因子：
--
作者：
Subedi GP;Barb AW
通讯作者：
Barb AW
影响因子：
1.2
作者：
Subedi, Ganesh P.;Johnson, Roy W.;Barb, Adam
通讯作者：
Barb, Adam
甘露糖-6-磷酸受体识别碳水化合物。
影响因子：
6.8
作者：
Kim, Jung-Ja P.;Olson, Linda J.;Dahms, Nancy M.
通讯作者：
Dahms, Nancy M.
影响因子：
2.9
作者：
Barb AW;Meng L;Gao Z;Johnson RW;Moremen KW;Prestegard JH
通讯作者：
Prestegard JH