Capture-stabilize approach for membrane protein SPR assays.
Capture-stabilize approach for membrane protein SPR assays.
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捕获稳定的方法用于膜蛋白SPR分析。
DOI：
10.1038/srep07360
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发表时间：
2014-12-08
影响因子：
4.6
通讯作者：
Brondyk W
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chu R;Reczek D;Brondyk W
利用表面等离子体共振技术测量抗体与完整膜蛋白的结合动力学一直是一项具有挑战性的工作，因为在芯片表面捕获膜蛋白同时保持其天然构象存在固有的困难。在这里，我们描述了一种方法，其中His标记的CXCR5，一种GPCR，被纯化并通过亲和标记捕获到Biacore芯片表面。捕获的受体蛋白通过有限的交联会稳定在芯片表面。得到的芯片表面保留了配体结合活性，并用于通过简单的低pH再生步骤的标准Biacore动力学方法进行单抗动力学分析。我们展示了与现有的基于多肽的结合分析相比，这种完整的受体分析的优势。我们进一步将捕获-稳定方法的应用扩展到病毒样颗粒，并展示了其在天然膜环境中分析CD52抗体的有效性。CD52是一种GPI锚定蛋白。该结果首次证明了用于膜蛋白SPR分析的化学稳定的芯片表面。
Measuring the binding kinetics of antibodies to intact membrane proteins by surface plasmon resonance has been challenging largely because of the inherent difficulties in capturing membrane proteins on chip surfaces while retaining their native conformation. Here we describe a method in which His-tagged CXCR5, a GPCR, was purified and captured on a Biacore chip surface via the affinity tag. The captured receptor protein was then stabilized on the chip surface by limited cross-linking. The resulting chip surface retained ligand binding activity and was used for monoclonal antibody kinetics assays by a standard Biacore kinetics assay method with a simple low pH regeneration step. We demonstrate the advantages of this whole receptor assay when compared to available peptide-based binding assays. We further extended the application of the capture-stabilize approach to virus-like particles and demonstrated its utility analyzing antibodies against CD52, a GPI-anchored protein, in its native membrane environment. The results are the first demonstration of chemically stabilized chip surfaces for membrane protein SPR assays.
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影响因子：
2.6
作者：
Nguyen, Tri-Hung;Havari, Evis;Shankara, Srinivas
通讯作者：
Shankara, Srinivas
DOI：
10.1126/science.1164772
发表时间：
2008-11-21
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Jaakola VP;Griffith MT;Hanson MA;Cherezov V;Chien EY;Lane JR;Ijzerman AP;Stevens RC
通讯作者：
Stevens RC
影响因子：
4.3
作者：
Phillips, K. Scott;Cheng, Quan
通讯作者：
Cheng, Quan
影响因子：
--
作者：
Mersich, Christa;Jungbauer, Alois
通讯作者：
Jungbauer, Alois
影响因子：
11.4
作者：
Vennema, H;Godeke, G J;Rossen, J W;Voorhout, W F;Horzinek, M C;Opstelten, D J;Rottier, P J
通讯作者：
Rottier, P J