Identification of a selective polymerase enables detection of N(6)-methyladenosine in RNA.
Identification of a selective polymerase enables detection of N(6)-methyladenosine in RNA.
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DOI：
10.1021/ja4105792
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发表时间：
2013-12-26
影响因子：
15
通讯作者：
Kool ET
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Harcourt EM;Ehrenschwender T;Batista PJ;Chang HY;Kool ET
N6-甲基腺苷（m6 A）是最丰富的mRNA修饰，与人类健康有着重要的联系。虽然最近的研究已经成功地鉴定了数千种含有修饰的哺乳动物RNA转录本，但要确定任何特定m6 A的确切位置是非常困难的。在这里，我们已经确定了一种聚合酶的逆转录酶活性（从嗜热栖热菌），这是选择性高达18倍的掺入胸苷相反的未修饰的A超过m6 A。我们表明，该酶可用于定位和定量m6 A合成RNA的分析暂停带，并已使用的酶串联与非选择性聚合酶定位的存在和位置的m6 A在高丰度的细胞RNA。通过这种方法，我们证明了哺乳动物28 S rRNA中m6 A的长期未确定的位置是核苷酸4190。
N6-methyladenosine (m6A) is the most abundant mRNA modification, and has important links to human health. While recent studies have successfully identified thousands of mammalian RNA transcripts containing the modification, it is extremely difficult to identify the exact location of any specific m6A. Here we have identified a polymerase with reverse transcriptase activity (from Thermus thermophilus) that is selective by up to 18-fold for incorporation of thymidine opposite unmodified A over m6A. We show that the enzyme can be used to locate and quantify m6A in synthetic RNAs by analysis of pausing bands, and have used the enzyme in tandem with a nonselective polymerase to locate the presence and position of m6A in high-abundance cellular RNAs. By this approach we demonstrate that the long-undetermined position of m6A in mammalian 28S rRNA is nucleotide 4190.
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影响因子：
48
作者：
Flusberg, Benjamin A.;Webster, Dale R.;Lee, Jessica H.;Travers, Kevin J.;Olivares, Eric C.;Clark, Tyson A.;Korlach, Jonas;Turner, Stephen W.
通讯作者：
Turner, Stephen W.
影响因子：
14.9
作者：
BACHELLERIE, JP;AMALRIC, F;CABOCHE, M
通讯作者：
CABOCHE, M
影响因子：
5.3
作者：
CAMPER, SA;ALBERS, RJ;ROTTMAN, FM
通讯作者：
ROTTMAN, FM
影响因子：
64.5
作者：
Meyer KD;Saletore Y;Zumbo P;Elemento O;Mason CE;Jaffrey SR
通讯作者：
Jaffrey SR
DOI：
10.1126/science.1151710
发表时间：
2007-11-30
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Gerken T;Girard CA;Tung YC;Webby CJ;Saudek V;Hewitson KS;Yeo GS;McDonough MA;Cunliffe S;McNeill LA;Galvanovskis J;Rorsman P;Robins P;Prieur X;Coll AP;Ma M;Jovanovic Z;Farooqi IS;Sedgwick B;Barroso I;Lindahl T;Ponting CP;Ashcroft FM;O'Rahilly S;Schofield CJ
通讯作者：
Schofield CJ