Correlative in-resin super-resolution and electron microscopy using standard fluorescent proteins.
Correlative in-resin super-resolution and electron microscopy using standard fluorescent proteins.
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DOI：
10.1038/srep09583
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发表时间：
2015-03-31
影响因子：
4.6
通讯作者：
Kaufmann R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Johnson E;Seiradake E;Jones EY;Davis I;Grünewald K;Kaufmann R
介绍了一种相关树脂超分辨荧光和电子显微镜（EM）观察哺乳动物培养细胞生物结构的方法。冷冻固定树脂嵌入样品提供了优越的结构保存，但在树脂中执行超分辨率仍然是一个挑战。我们确定了样品制备过程中高压冷冻、冷冻取代和树脂包埋的关键方面，这些方面对于保存荧光和标准荧光蛋白（如mGFP、mVenus和mRuby2）的光开关至关重要。这使我们能够结合单分子定位显微镜和透射电镜成像标准荧光蛋白在冷冻固定树脂包埋细胞。在不使用化学固定或特殊荧光团的情况下，我们在荧光图像中实现了40-50 nm （~17 nm平均单分子定位精度）的结构分辨率。使用这种方法可以在纳米水平上使荧光标记的结构与同一细胞中的超微结构相关联，并具有优越的结构保存能力。
We introduce a method for correlative in-resin super-resolution fluorescence and electron microscopy (EM) of biological structures in mammalian culture cells. Cryo-fixed resin embedded samples offer superior structural preservation, performing in-resin super-resolution, however, remains a challenge. We identified key aspects of the sample preparation procedure of high pressure freezing, freeze substitution and resin embedding that are critical for preserving fluorescence and photo-switching of standard fluorescent proteins, such as mGFP, mVenus and mRuby2. This enabled us to combine single molecule localization microscopy with transmission electron microscopy imaging of standard fluorescent proteins in cryo-fixed resin embedded cells. We achieved a structural resolution of 40–50 nm (~17 nm average single molecule localization accuracy) in the fluorescence images without the use of chemical fixation or special fluorophores. Using this approach enabled the correlation of fluorescently labeled structures to the ultrastructure in the same cell at the nanometer level and superior structural preservation.
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影响因子：
48
作者：
Biteen, Julie S.;Thompson, Michael A.;Tselentis, Nicole K.;Bowman, Grant R.;Shapiro, Lucy;Moerner, W. E.
通讯作者：
Moerner, W. E.
影响因子：
16.6
作者：
Fabrowski, Piotr;Necakov, Aleksandar S.;Mumbauer, Simone;Loeser, Eva;Reversi, Alessandra;Streichan, Sebastian;Briggs, John A. G.;De Renzis, Stefano
通讯作者：
De Renzis, Stefano
影响因子：
10.5
作者：
Coschi, Courtney H.;Martens, Alison L.;Dick, Frederick A.
通讯作者：
Dick, Frederick A.
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7.5
作者：
Aricescu, A. Radu;Jones, E. Yvonne
通讯作者：
Jones, E. Yvonne
影响因子：
10.8
作者：
Kaufmann R;Schellenberger P;Seiradake E;Dobbie IM;Jones EY;Davis I;Hagen C;Grünewald K
通讯作者：
Grünewald K