New versatile plasmid vectors for expression of hybrid proteins coded by a cloned gene fused to lacZ gene sequences encoding an enzymatically active carboxy-terminal portion of beta-galactosidase.
New versatile plasmid vectors for expression of hybrid proteins coded by a cloned gene fused to lacZ gene sequences encoding an enzymatically active carboxy-terminal portion of beta-galactosidase.
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新型多功能质粒载体，用于表达由与编码 β-半乳糖苷酶酶活性羧基末端部分的 lacZ 基因序列融合的克隆基因编码的杂合蛋白。
DOI：
10.1016/0378-1119(83)90169-5
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发表时间：
1983
期刊：
影响因子：
3.5
通讯作者：
Casadaban,MJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Shapira,SK;Chou,J;Richaud,FV;Casadaban,MJ
已经构建了一类新的质粒克隆载体，其在无启动子的lacZ基因的各种翻译阅读相中具有切割位点。通过将含有启动子、翻译起始位点和基因的氨基末端部分的DNA片段克隆到lacZ基因的正确翻译阅读框中，这些载体可以产生融合的杂合蛋白。形成具有酶活性的杂合β-半乳糖苷酶蛋白，其具有由克隆的基因片段编码的氨基末端氨基酸。另一类载体保留了一个激活的lac-promoter和lacZ启动区，它可以指导没有基因起始区的DNA片段合成杂合蛋白。这些载体允许从乳糖起始区开始转录，或在插入片段内停止和重新开始，进入β-半乳糖苷酶基因的基本部分。还描述了一种smalllacZ基因片段（盒），不含质粒复制子和任何其它lacZ基因，其可直接插入其它基因中以形成杂合蛋白融合体。多限制性位点序列很容易被移动到这些载体中的一些通过纳入耐药基因，作为标记的选择和检测这些序列;这些标记可以很容易地删除后。
A new class of plasmid cloning vectors has been constructed with cleavage sites in a variety of translational reading phases of the promoterlesslacZgene. Fused hybrid proteins can be produced by these vectors by cloning DNA fragments containing the promoter, translation initiation site, and the amino terminal portion of a gene, all with proper orientation, into the correct translational readingframe of thelacZgene. Enzymatically active hybrid-β-galactosidase proteins are formed, which have amino-terminal amino acids encoded by the cloned gene segment. Another class of these vectors retains an activelacpromoter andlacZtranslation-initiation region, which can direct hybrid protein synthesis from DNA fragments that do not have gene initiation regions. These vectors allow transcription from thelacZinitiation region to proceed across, or to stop and restart within, an inserted fragment into the essential part of the β-galactosidase gene. Also described is a smalllacZgene fragment (cartridge), without a plasmid replicon and without any otherlacgenes, which can be inserted directly into other genes to form hybrid protein fusions. Polyrestriction site sequences were easily moved into some of these vectors by incorporating drug-resistance genes that serve as markers for the selection and detection of these sequences; those markers can be easily removed afterwards.
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