A Cas-embedding strategy for minimizing off-target effects of DNA base editors.
A Cas-embedding strategy for minimizing off-target effects of DNA base editors.
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用于最小化DNA碱基编辑器的脱靶效应的Cas-embedding策略。
DOI：
10.1038/s41467-020-19690-0
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发表时间：
2020-11-27
影响因子：
16.6
通讯作者：
Chi T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Liu Y;Zhou C;Huang S;Dang L;Wei Y;He J;Zhou Y;Mao S;Tao W;Zhang Y;Yang H;Huang X;Chi T
DNA碱基编辑器，通常包含融合到nCas 9的N末端的编辑酶，对DNA和/或RNA显示出脱靶效应，这仍然是其临床应用的障碍。脱靶编辑通常通过合理设计的点突变来反击，但这种方法是繁琐的，并不总是有效的。在这里，我们报告说，A > G和C > T编辑器的脱靶效应可以显著降低，而不会损害靶向编辑，只需将编辑酶插入nCas 9中间的耐受位点，使用基于转座子的遗传筛选鉴定。此外，采用这种Cas嵌入策略，我们已经创建了一种高度特异性的编辑器，能够在甲基化和富含GC的序列上进行有效的C > T编辑。DNA碱基编辑器可以显示对DNA和RNA的脱靶效应。在这里，作者将碱基编辑酶嵌入nCas 9的中间，以减少这些酶，而不影响靶向编辑。
DNA base editors, typically comprising editing enzymes fused to the N-terminus of nCas9, display off-target effects on DNA and/or RNA, which have remained an obstacle to their clinical applications. Off-target edits are typically countered via rationally designed point mutations, but the approach is tedious and not always effective. Here, we report that the off-target effects of both A > G and C > T editors can be dramatically reduced without compromising the on-target editing simply by inserting the editing enzymes into the middle of nCas9 at tolerant sites identified using a transposon-based genetic screen. Furthermore, employing this Cas-embedding strategy, we have created a highly specific editor capable of efficient C > T editing at methylated and GC-rich sequences. DNA base editors can display off-target effects on DNA and RNA. Here the authors embed the base editing enzymes in the middle of nCas9 to reduce these without impacting on-target editing.
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