Functional significance of the Rad51-Srs2 complex in Rad51 presynaptic filament disruption.
Functional significance of the Rad51-Srs2 complex in Rad51 presynaptic filament disruption.
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DOI：
10.1093/nar/gkp748
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发表时间：
2009-11
影响因子：
14.9
通讯作者：
Sung P
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Colavito S;Macris-Kiss M;Seong C;Gleeson O;Greene EC;Klein HL;Krejci L;Sung P
SRS2（RAD 六筛选突变体 2 的抑制因子）基因编码一种 ATP 依赖性 DNA 解旋酶，可调节酿酒酵母中的同源重组。 SRS2 突变会导致超重组表型、对 DNA 损伤剂的敏感性以及影响 DNA 代谢的突变的合成致死性。其中一些表型可以通过促进同源重组的 RAD52 上位基团的失活基因来抑制，这表明不适当的重组是突变表型的根本原因。与遗传数据一致，纯化的 Srs2 通过破坏 Rad51-ssDNA 突触前丝来强烈抑制 Rad51 介导的重组反应。 Srs2 在酵母双杂交实验和体外实验中与 Rad51 相互作用。为了研究 Srs2-Rad51 复合物的功能相关性，我们生成了 srs2 截短突变体，它们保留了完整的 ATP 酶和解旋酶活性，但与 Rad51 相互作用的能力不同。重要的是，Rad51 相互作用减弱的 srs2 突变蛋白破坏 Rad51 突触前丝的能力要小得多。 Srs2 的内部缺失同样会减弱 Rad51 的相互作用和抗重组酶活性。我们还提供证据表明删除 Srs2 C 末端会产生超重组表型。这些结果强调了 Rad51 相互作用在 Srs2 的抗重组酶功能中的重要性，并提供了该 Srs2 功能可以与其解旋酶活性脱钩的证据。
The SRS2 (Suppressor of RAD Six screen mutant 2) gene encodes an ATP-dependent DNA helicase that regulates homologous recombination in Saccharomyces cerevisiae. Mutations in SRS2 result in a hyper-recombination phenotype, sensitivity to DNA damaging agents and synthetic lethality with mutations that affect DNA metabolism. Several of these phenotypes can be suppressed by inactivating genes of the RAD52 epistasis group that promote homologous recombination, implicating inappropriate recombination as the underlying cause of the mutant phenotype. Consistent with the genetic data, purified Srs2 strongly inhibits Rad51-mediated recombination reactions by disrupting the Rad51-ssDNA presynaptic filament. Srs2 interacts with Rad51 in the yeast two-hybrid assay and also in vitro. To investigate the functional relevance of the Srs2-Rad51 complex, we have generated srs2 truncation mutants that retain full ATPase and helicase activities, but differ in their ability to interact with Rad51. Importantly, the srs2 mutant proteins attenuated for Rad51 interaction are much less capable of Rad51 presynaptic filament disruption. An internal deletion in Srs2 likewise diminishes Rad51 interaction and anti-recombinase activity. We also present evidence that deleting the Srs2 C-terminus engenders a hyper-recombination phenotype. These results highlight the importance of Rad51 interaction in the anti-recombinase function of Srs2, and provide evidence that this Srs2 function can be uncoupled from its helicase activity.
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影响因子：
3.2
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LAWRENCE, CW;CHRISTENSEN, RB
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Burgess RC;Lisby M;Altmannova V;Krejci L;Sung P;Rothstein R
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Rothstein R