A CRISPR/Cas9-based system for reprogramming cell lineage specification.
A CRISPR/Cas9-based system for reprogramming cell lineage specification.
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基于CRISPR/CAS9的系统，用于重编程单元谱线规范。
DOI：
10.1016/j.stemcr.2014.09.013
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发表时间：
2014-12-09
影响因子：
5.9
通讯作者：
Leong KW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chakraborty S;Ji H;Kabadi AM;Gersbach CA;Christoforou N;Leong KW
CRISPR/Cas9 系统的基因激活有可能为科学和医学带来新的方法，但必须增强该技术才能有力地控制细胞行为。我们发现两个反式激活结构域与 Cas9 的融合可显着增强基因激活至重新编程细胞表型所需的水平。利用该系统定向激活内源性 Myod1 基因位点，使小鼠胚胎成纤维细胞稳定且持续地重编程为骨骼肌细胞。通过激活内源性 Myod1 基因获得的肌源性标志物表达水平与通过慢病毒递送的 MYOD1 转录因子过表达获得的水平相当。 RNA引导的VP64dCas9-BFPVP64融合蛋白强力激活内源性Myod1 反式激活的Myod1可以将小鼠胚胎成纤维细胞重编程为骨骼肌细胞 VP64与dCas9-BFP的N和C末端融合有利于重编程 肌源性基因表达与基于MYOD1过表达的重编程相当 在本文中，Leong及其同事展示了小鼠的骨骼重编程通过 RNA 引导的 VP64dCas9-BFPVP64 内源性 Myod1 反式激活来抑制成纤维细胞。 VP64 反式激活结构域与 Cas9 的双重融合对于将 Myod1 基因激活至直接重编程所需的水平至关重要。由此产生的肌原基因表达水平与 MYOD1 转基因过表达所达到的水平相当。
Gene activation by the CRISPR/Cas9 system has the potential to enable new approaches to science and medicine, but the technology must be enhanced to robustly control cell behavior. We show that the fusion of two transactivation domains to Cas9 dramatically enhances gene activation to a level that is necessary to reprogram cell phenotype. Targeted activation of the endogenous Myod1 gene locus with this system led to stable and sustained reprogramming of mouse embryonic fibroblasts into skeletal myocytes. The levels of myogenic marker expression obtained by the activation of endogenous Myod1 gene were comparable to that achieved by overexpression of lentivirally delivered MYOD1 transcription factor. RNA-guided VP64dCas9-BFPVP64 fusion protein robustly activates endogenous Myod1 Transactivated Myod1 can reprogram mouse embryonic fibroblasts to skeletal myocytes VP64 fusion to both the N and C terminus of dCas9-BFP facilitates reprogramming Myogenic gene expression is comparable to MYOD1 overexpression-based reprogramming In this article, Leong and colleagues show skeletal reprogramming of mouse fibroblasts by RNA-guided VP64dCas9-BFPVP64-based transactivation of endogenous Myod1. Dual fusion of VP64 transactivation domains to Cas9 is critical for activating the Myod1 gene to a level necessary for the direct reprogramming. The resultant myogenic gene expression levels are comparable to that achieved by overexpression of MYOD1 transgene.
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影响因子：
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作者：
通讯作者：
--
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Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
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Cho, Seung Woo;Kim, Sojung;Kim, Jin-Soo
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作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1126/science.1232033
发表时间：
2013-02-15
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Mali P;Yang L;Esvelt KM;Aach J;Guell M;DiCarlo JE;Norville JE;Church GM
通讯作者：
Church GM