RNA-guided human genome engineering via Cas9.
RNA-guided human genome engineering via Cas9.
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DOI：
10.1126/science.1232033
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发表时间：
2013-02-15
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Church GM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mali P;Yang L;Esvelt KM;Aach J;Guell M;DiCarlo JE;Norville JE;Church GM
细菌和古细菌已经进化出适应性免疫防御，称为成簇规则间隔短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关（Cas）系统，其使用短RNA来指导外源核酸的降解。在这里，我们设计了II型细菌CRISPR系统，使其在人类细胞中与定制的引导RNA（gRNA）一起发挥作用。对于内源性AAVS1基因座，我们在293T细胞中获得了10 - 25%的靶向率，在K562细胞中获得了13 - 8%的靶向率，并且在诱导的多能干细胞中获得了2 - 4%的靶向率。我们表明，这个过程依赖于CRISPR组件;是序列特异性的;并且，在同时引入多个gRNA时，可以实现靶基因座的多重编辑。我们还计算了靶向约40.5%人类外显子的约190 K独特gRNA的全基因组资源。我们的研究结果建立了一个RNA指导的编辑工具，用于简便、稳健和可复用的人类基因组工程。
Bacteria and archaea have evolved adaptive immune defenses, termed clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated (Cas) systems, that use short RNA to direct degradation of foreign nucleic acids. Here, we engineer the type II bacterial CRISPR system to function with custom guide RNA (gRNA) in human cells. For the endogenous AAVS1 locus, we obtained targeting rates of 10 to 25% in 293T cells, 13 to 8% in K562 cells, and 2 to 4% in induced pluripotent stem cells. We show that this process relies on CRISPR components; is sequence-specific; and, upon simultaneous introduction of multiple gRNAs, can effect multiplex editing of target loci. We also compute a genome-wide resource of ~190 K unique gRNAs targeting ~40.5% of human exons. Our results establish an RNA-guided editing tool for facile, robust, and multiplexable human genome engineering.
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影响因子：
46.9
作者：
Hockemeyer, Dirk;Soldner, Frank;Beard, Caroline;Gao, Qing;Mitalipova, Maisam;DeKelver, Russell C.;Katibah, George E.;Amora, Ranier;Boydston, Elizabeth A.;Zeitler, Bryan;Meng, Xiangdong;Miller, Jeffrey C.;Zhang, Lei;Rebar, Edward J.;Gregory, Philip D.;Urnov, Fyodor D.;Jaenisch, Rudolf
通讯作者：
Jaenisch, Rudolf
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
56.9
作者：
Boch, Jens;Scholze, Heidi;Bonas, Ulla
通讯作者：
Bonas, Ulla
通过反式编码的小 RNA 和宿主因子 RNase III 进行 CRISPR RNA 成熟。
影响因子：
64.8
作者：
Deltcheva, Elitza;Chylinski, Krzysztof;Sharma, Cynthia M.;Gonzales, Karine;Chao, Yanjie;Pirzada, Zaid A.;Eckert, Maria R.;Vogel, Joerg;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
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