BAC modification through serial or simultaneous use of CRE/Lox technology.
BAC modification through serial or simultaneous use of CRE/Lox technology.
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DOI：
10.1155/2011/924068
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发表时间：
2011
影响因子：
--
通讯作者：
Krumlauf R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Parrish M;Unruh J;Krumlauf R
细菌人工染色体(BAC)是小鼠基因组分析的重要工具，因为它们具有繁殖大插入片段的能力。然而，这些结构的大小阻碍了使用传统的分子生物学技术进行修饰和操作。因此，诸如重组工程和CRE/Lox方法等技术已成为此类目的的严重依赖。在这项工作中，我们研究了Lox变异位点对BAC的连续和/或同时操作的适用性。我们证明LOX间隔区突变体是非常特异的，反向重复变异体通过降低Cre对位点的亲和力来降低LOX反应速率，同时保留一些功能。利用这些方法，我们产生了一系列的修饰，包括四个独立的改变，产生了一个小鼠HoxB BAC，将荧光报告蛋白插入到四个相邻的HOX基因中。我们还使用间隔区变异和反向重复变异的组合产生了特定的、同时的缺失。这些技术将促进BAC的操作，并开辟BAC和基因组操作的新方法体系。
Bacterial Artificial Chromosomes (BACs) are vital tools in mouse genomic analyses because of their ability to propagate large inserts. The size of these constructs, however, prevents the use of conventional molecular biology techniques for modification and manipulation. Techniques such as recombineering and Cre/Lox methodologies have thus become heavily relied upon for such purposes. In this work, we investigate the applicability of Lox variant sites for serial and/or simultaneous manipulations of BACs. We show that Lox spacer mutants are very specific, and inverted repeat variants reduce Lox reaction rates through reducing the affinity of Cre for the site, while retaining some functionality. Employing these methods, we produced serial modifications encompassing four independent changes which generated a mouse HoxB BAC with fluorescent reporter proteins inserted into four adjacent Hox genes. We also generated specific, simultaneous deletions using combinations of spacer variants and inverted repeat variants. These techniques will facilitate BAC manipulations and open a new repertoire of methods for BAC and genome manipulation.
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影响因子：
14.9
作者：
Warming S;Costantino N;Court DL;Jenkins NA;Copeland NG
通讯作者：
Copeland NG
影响因子：
10.5
作者：
Maconochie, MK;Nonchev, S;Krumlauf, R
通讯作者：
Krumlauf, R
影响因子：
4.4
作者：
Lambert, Jolanda M.;Bongers, Roger S.;Kjeerebezem, Michiel
通讯作者：
Kjeerebezem, Michiel
DOI：
10.1073/pnas.89.18.8794
发表时间：
1992-09-15
影响因子：
11.1
作者：
SHIZUYA, H;BIRREN, B;SIMON, M
通讯作者：
SIMON, M
影响因子：
7
作者：
Gong, SC;Yang, XW;Heintz, N
通讯作者：
Heintz, N