Purified native microtubule associated protein MAP1A: kinetics of microtubule assembly and MAP1A/tubulin stoichiometry.
Purified native microtubule associated protein MAP1A: kinetics of microtubule assembly and MAP1A/tubulin stoichiometry.
复制标题
纯化的天然微管相关蛋白 MAP1A：微管组装动力学和 MAP1A/微管蛋白化学计量。
DOI：
10.1021/bi00207a013
复制
发表时间：
1994
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
K. Islam
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
B. Pedrotti;K. Islam
在最近的研究中，我们已经表明磺酸盐缓冲液影响微管组装并改变微管蛋白质组成（Pedrotti等人，1993年）。特别地，我们注意到PIPES缓冲液导致从微管表面去除MAP 1而不影响MAP 2与微管的缔合。这一观察结果已被利用，以开发一个简单的纯化程序MAP 1A使用两次循环的微管蛋白从全牛脑制备。在离子交换柱上的单个色谱步骤产生> 90%纯度的MAP 1A。使用纯化的MAP 1A，我们现在显示MAP 1A（a）以剂量依赖性方式结合未聚合的微管蛋白和组装的微管，（B）结合组装的微管中的13-15 mol微管蛋白二聚体，（c）促进微管蛋白的成核和伸长，和（d）促进低GTP浓度下微管蛋白二聚体和高GTP浓度下微管蛋白二聚体和寡聚体的掺入。MAP 1A降低了组装的临界浓度，MAP 1A促进的二聚体掺入的缔合速率常数（K+1）为39.3 × 10（6）M-1 s-1，解离速率常数（K-1）为15 s-1;这两个常数都比MAP 2高约2-3倍。
In a recent study, we have shown that sulfonate buffers affect microtubule assembly and alter microtubule protein composition (Pedrotti et al., 1993). In particular, we noted that PIPES buffer leads to removal of MAP1 from the microtubule surface without affecting the association of MAP2 with microtubules. This observation has been exploited to develop a simple purification procedure for MAP1A using twice-cycled microtubule protein prepared from whole bovine brain. A single chromatographic step on an ion-exchange column results in > 90% pure MAP1A. Using purified MAP1A, we now show that MAP1A (a) binds in a dose-dependent manner to unpolymerized tubulin and assembled microtubules, (b) binds 13-15 mol of tubulin dimers in assembled microtubules, (c) promotes both nucleation and elongation of tubulin, and (d) promotes incorporation of tubulin dimers at low GTP concentrations and of tubulin dimers and oligomers at high GTP concentrations. MAP1A lowers the critical concentration for assembly, and MAP1A-promoted incorporation of dimers has an association rate constant (K+1) of 39.3 x 10(6) M-1s-1 and a dissociation rate constant (K-1) of 15 s-1; both constants are about 2-3-fold higher compared with MAP2.
登录
查看更多内容
微管相关蛋白2与微管的平衡结合机制。
DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Wallis,KT;Azhar,S;Rho,MB;Lewis,SA;Cowan,NJ;Murphy,DB
通讯作者：
Murphy,DB
低分子量微管相关蛋白是微管相关蛋白 1 (MAP 1) 的轻链。
DOI：
10.1073/pnas.80.5.1342
发表时间：
1983
影响因子：
11.1
作者：
Vallee,RB;Davis,SE
通讯作者：
Davis,SE
关于使用热稳定性作为鉴定微管相关蛋白（MAP）的标准。
DOI：
10.1016/0006-291x(85)91850-9
发表时间：
1985
影响因子：
3.1
作者：
Vallee,RB
通讯作者：
Vallee,RB
影响因子：
--
作者：
PAPASOZOMENOS, SC;BINDER, LI
通讯作者：
BINDER, LI