Targeted mutagenesis in mouse cells and embryos using an enhanced prime editor.
Targeted mutagenesis in mouse cells and embryos using an enhanced prime editor.
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DOI：
10.1186/s13059-021-02389-w
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发表时间：
2021-06-03
期刊：
影响因子：
12.3
通讯作者：
Kim K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Park SJ;Jeong TY;Shin SK;Yoon DE;Lim SY;Kim SP;Choi J;Lee H;Hong JI;Ahn J;Seong JK;Kim K
Prime编辑是一种新型的基因组编辑工具，由CRISPR-Cas9尼克酶和工程逆转录酶组成，可以诱导有针对性的突变。然而，要优化和提高精品编辑的效率还需要付出大量的努力。在这里，我们介绍了两种利用近端死亡sgRNA和染色质调节肽来提高编辑效率的策略。我们使用增强的基元编辑来产生编辑频率高达47%的Igf2突变小鼠，并观察到生殖系传播，没有偏离目标的效应，并且表现为矮小。这种改进的素数编辑方法可以有效地应用于细胞研究和生成小鼠模型。网上版载有补充材料，可在10.1186/s13059-021-02389-w查阅。
Prime editors, novel genome-editing tools consisting of a CRISPR-Cas9 nickase and an engineered reverse transcriptase, can induce targeted mutagenesis. Nevertheless, much effort is required to optimize and improve the efficiency of prime-editing. Herein, we introduce two strategies to improve the editing efficiency using proximal dead sgRNA and chromatin-modulating peptides. We used enhanced prime-editing to generate Igf2 mutant mice with editing frequencies of up to 47% and observed germline transmission, no off-target effects, and a dwarf phenotype. This improved prime-editing method can be efficiently applied to cell research and to generate mouse models. The online version contains supplementary material available at 10.1186/s13059-021-02389-w.
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