Targeting Phosphotyrosine in Native Proteins with Conditional, Bispecific Antibody Traps.
Targeting Phosphotyrosine in Native Proteins with Conditional, Bispecific Antibody Traps.
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DOI：
10.1021/jacs.0c08458
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发表时间：
2020-10-14
影响因子：
15
通讯作者：
Wells JA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhou XX;Bracken CJ;Zhang K;Zhou J;Mou Y;Wang L;Cheng Y;Leung KK;Wells JA
工程化序列特异性抗体（Ab）针对嵌入折叠多肽中的磷酸酪氨酸（pY）基序仍然具有高度挑战性，因为严格要求同时识别pY基序和周围折叠蛋白表位。在这里，我们提出了一种名为磷酸酪氨酸靶向重组抗体对，或pY-TRAP，在体外工程的天然pY蛋白的结合剂的方法。具体来说，我们通过非天然氨基酸错误掺入来产生pY蛋白，诱变通用pY结合Ab以产生针对pY蛋白上的pY基序的第一结合物B1，然后针对B1−pY蛋白复合物选择识别B1和含pY蛋白复合物的复合表位的第二结合物B2。我们应用pY-TRAP来创建高度特异性的结合物，以折叠Ub-pY 59，一种很少研究的仅在癌组织中观察到的Ub磷酸化形式，和ZAP 70-pY 248，一种在T细胞反馈信号通路中调节的激酶磷酸化形式。pY-TRAP与野生型蛋白质或与测试的其它pY肽或蛋白质不具有可检测的结合。这种pY-TRAP方法用作将序列特异性Ab结合物工程化至天然pY蛋白的可推广的方法。
Engineering sequence-specific antibodies (Abs) against phosphotyrosine (pY) motifs embedded in folded polypeptides remains highly challenging because of the stringent requirement for simultaneous recognition of the pY motif and the surrounding folded protein epitope. Here, we present a method named phosphotyrosine Targeting by Recombinant Ab Pair, or pY-TRAP, for in vitro engineering of binders for native pY proteins. Specifically, we create the pY protein by unnatural amino acid misincorporation, mutagenize a universal pY-binding Ab to create a first binder B1 for the pY motif on the pY protein, and then select against the B1−pY protein complex for a second binder B2 that recognizes the composite epitope of B1 and the pY-containing protein complex. We applied pY-TRAP to create highly specific binders to folded Ub-pY59, a rarely studied Ub phosphoform exclusively observed in cancerous tissues, and ZAP70-pY248, a kinase phosphoform regulated in feedback signaling pathways in T cells. The pY-TRAPs do not have detectable binding to wild-type proteins or to other pY peptides or proteins tested. This pY-TRAP approach serves as a generalizable method for engineering sequence-specific Ab binders to native pY proteins.
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使用扩展的遗传密码将磷酸酪氨酸的特定于位点掺入。
影响因子：
14.8
作者：
Hoppmann C;Wong A;Yang B;Li S;Hunter T;Shokat KM;Wang L
通讯作者：
Wang L
DOI：
10.1007/978-1-61779-024-9_1
发表时间：
2011-01-01
期刊：
SIGNAL TRANSDUCTION IMMUNOHISTOCHEMISTRY: METHODS AND PROTOCOLS
影响因子：
--
作者：
Brumbaugh, Kathy;Johnson, Wade;Campos-Gonzalez, Roberto
通讯作者：
Campos-Gonzalez, Roberto
影响因子：
3
作者：
Durek P;Schudoma C;Weckwerth W;Selbig J;Walther D
通讯作者：
Walther D
影响因子：
14.9
作者：
Hornbeck PV;Kornhauser JM;Tkachev S;Zhang B;Skrzypek E;Murray B;Latham V;Sullivan M
通讯作者：
Sullivan M
DOI：
10.1074/mcp.o115.052209
发表时间：
2015-10
期刊：
Molecular & cellular proteomics : MCP
影响因子：
--
作者：
Hornsby M;Paduch M;Miersch S;Sääf A;Matsuguchi T;Lee B;Wypisniak K;Doak A;King D;Usatyuk S;Perry K;Lu V;Thomas W;Luke J;Goodman J;Hoey RJ;Lai D;Griffin C;Li Z;Vizeacoumar FJ;Dong D;Campbell E;Anderson S;Zhong N;Gräslund S;Koide S;Moffat J;Sidhu S;Kossiakoff A;Wells J
通讯作者：
Wells J