Inducible protein degradation in Bacillus subtilis using heterologous peptide tags and adaptor proteins to target substrates to the protease ClpXP.
Inducible protein degradation in Bacillus subtilis using heterologous peptide tags and adaptor proteins to target substrates to the protease ClpXP.
复制标题
DOI：
10.1111/j.1365-2958.2008.06467.x
复制
发表时间：
2008-11
影响因子：
3.6
通讯作者：
Grossman AD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Griffith KL;Grossman AD
操纵蛋白质水平的能力对于解剖调控途径、阐明基因功能和构建合成生物电路是有用的。我们设计了一个用于枯草芽孢杆菌的诱导蛋白降解系统，该系统基于大肠杆菌和新月杆菌的ssra -标签和SspB适配器，将蛋白质传递到ClpXP进行蛋白水解。在这个系统中，修饰的ssrA降解标签被融合到感兴趣的基因的3 '端。与野生型ssrA不同，这些修饰的标签需要适配蛋白SspB来靶向标记蛋白进行蛋白水解。在缺乏SspB的情况下，标记蛋白积累到接近生理水平。通过从调控启动子诱导SspB表达，标记的底物被快速传递到枯草芽孢杆菌ClpXP蛋白酶降解。我们利用该系统降解了报告基因GFP和几种天然枯草芽孢杆菌蛋白，包括转录因子ComA、两种产孢激酶（KinA、KinB）和产孢和染色体分配蛋白Spo0J。我们还使用修饰的大肠杆菌和新月杆菌ssrA标签来独立控制同一细胞中两种不同蛋白质的降解。这些工具将有助于研究枯草芽孢杆菌的生物过程，并可能被修改用于其他细菌。
The ability to manipulate protein levels is useful for dissecting regulatory pathways, elucidating gene function, and constructing synthetic biological circuits. We engineered an inducible protein degradation system for use in Bacillus subtilis based on E. coli and C. crescentus ssrA-tags and SspB adaptors that deliver proteins to ClpXP for proteolysis. In this system, modified ssrA degradation tags are fused onto the 3’ end of the genes of interest. Unlike wild type ssrA, these modified tags require the adaptor protein SspB to target tagged proteins for proteolysis. In the absence of SspB, the tagged proteins accumulate to near physiological levels. By inducing SspB expression from a regulated promoter, the tagged substrates are rapidly delivered to the B. subtilis ClpXP protease for degradation. We used this system to degrade the reporter GFP and several native B. subtilis proteins, including, the transcription factor ComA, two sporulation kinases (KinA, KinB) and the sporulation and chromosome partitioning protein Spo0J. We also used modified E. coli and C. crescentus ssrA tags to independently control the degradation of two different proteins in the same cell. These tools will be useful for studying biological processes in B. subtilis and can potentially be modified for use in other bacteria.
登录
查看更多内容
影响因子：
3.5
作者：
GueroutFleury, AM;Frandsen, N;Stragier, P
通讯作者：
Stragier, P
影响因子：
10.5
作者：
Gottesman, S;Roche, E;Sauer, RT
通讯作者：
Sauer, RT
DOI：
10.1073/pnas.91.13.5793
发表时间：
1994-06-21
影响因子：
11.1
作者：
KONG, LY;DUBNAU, D
通讯作者：
DUBNAU, D
影响因子：
5.7
作者：
Chien, Peter;Grant, Robert A.;Baker, Tania A.
通讯作者：
Baker, Tania A.
影响因子：
3.2
作者：
Lessner, Faith H.;Venters, Bryan J.;Keiler, Kenneth C.
通讯作者：
Keiler, Kenneth C.