Programmable protein arrays for immunoprofiling HPV-associated cancers.
Programmable protein arrays for immunoprofiling HPV-associated cancers.
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DOI：
10.1002/pmic.201500376
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发表时间：
2016-04
期刊：
影响因子：
3.4
通讯作者：
Anderson KS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ewaisha R;Meshay I;Resnik J;Katchman BA;Anderson KS
每年有超过60万例癌症是由人乳头瘤病毒（HPV）引起的，包括宫颈癌、肛门生殖器癌和口咽癌（OPC）。理解HPV免疫生物学的一个关键挑战是致癌HPV类型的多样性以及对HPV抗原多重展示以测量抗体应答的需求。我们已经生成了定制的HPV蛋白微阵列，显示98种蛋白作为C-末端GST融合蛋白，代表两种低风险HPV类型（HPV 6和11）和十种致癌高危HPV类型（HPV 16，18，31，33，35，39，45，51，52和58）的八种抗原。我们使用人细胞裂解物表达系统证明了96/98抗原的稳健和可重复的蛋白质表达。鉴定了4株单克隆抗体的靶表位和特异性。使用来自10名新诊断的OPC患者和10名对照的血清，我们证明了对HPV 16 E1、E2和E7的特异性IgG血清反应性（病例与对照相比分别增加1.52、2.19和1.35倍，所有p < 0.005），证实了我们在ELISA平台上的先前数据。我们还检测了宫颈癌患者血清中的HPV 52 E7抗体。HPV蛋白芯片具有快速鉴定12种HPV类型血清学应答的潜力。
Over 600 000 cancers each year are attributed to the human papillomavirus (HPV), including cervical, anogenital and oropharyngeal cancers (OPC). A key challenge in understanding HPV immunobiology is the diversity of oncogenic HPV types and the need for multiplexed display of HPV antigens to measure antibody responses. We have generated custom HPV protein microarrays displaying 98 proteins as C-terminal GST fusion proteins, representing eight antigens of two low-risk HPV types (HPV6 and 11) and ten oncogenic high-risk HPV types (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52 and 58). We demonstrate robust and reproducible protein expression of 96/98 of the antigens using a human cell lysate expression system. The target epitopes and specificities of four monoclonal antibodies were identified. Using sera from ten patients with newly diagnosed OPC and ten controls, we demonstrate specific IgG seroreactivity to HPV16 E1, E2, and E7 (a fold increase of 1.52, 2.19 and 1.35 in cases vs. controls, respectively, all p < 0.005), confirming our prior data on an ELISA platform. We also detect HPV52 E7 Abs in serum from a patient with cervical cancer. The HPV protein array has potential for rapid identification of serologic responses to 12 HPV types.
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