A simple and cost-effective method for screening of CRISPR/Cas9-induced homozygous/biallelic mutants.
A simple and cost-effective method for screening of CRISPR/Cas9-induced homozygous/biallelic mutants.
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一种简单且经济有效的筛选 CRISPR/Cas9 诱导的纯合/双等位基因突变体的方法
DOI：
10.1186/s13007-018-0305-8
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
5.1
通讯作者：
Miao Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Guo J;Li K;Jin L;Xu R;Miao K;Yang F;Qi C;Zhang L;Botella JR;Wang R;Miao Y
CRISPR/Cas9系统正被许多研究小组用于多种植物物种的基因组编辑目的。传统的测序方法鉴定纯合突变体耗时、费力且昂贵。结果我们建立了一种基于突变位点的特异性引物聚合酶链反应（MSBSP-PCR）筛选CRISPR/ cas9诱导突变体的方法。MSBSP-PCR方法成功鉴定了烟叶中纯合子/双等位基因突变体，我们推测该方法可用于鉴定其他植物物种中CRISPR/ cas9诱导的突变体。与传统测序方法相比，MSBSP-PCR更简单、快速、廉价。结论MSBSP-PCR方法操作简单，可节省筛选CRISPR/ cas9诱导纯合/双等位基因突变体的时间和成本。
BackgroundThe CRISPR/Cas9 system is being used for genome editing purposes by many research groups in multiple plant species. Traditional sequencing methods to identify homozygous mutants are time-consuming, laborious and expensive.ResultsWe have developed a method to screen CRISPR/Cas9-induced mutants through Mutation Sites Based Specific Primers Polymerase Chain Reaction (MSBSP-PCR). The MSBSP-PCR method was successfully used to identify homozygous/biallelic mutants inNicotiana tabacumandArabidopsis thaliana, and we speculate that it can be used for the identification of CRISPR/Cas9-induced mutants in other plant species. Compared to traditional sequencing methods, MSBSP-PCR is simpler, faster and cheaper.ConclusionsThe MSBSP-PCR method is simple to implement and can save time and cost in the screening of CRISPR/Cas9-induced homozygous/biallelic mutants.
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