Facile single-molecule pull-down assay for analysis of endogenous proteins.
Facile single-molecule pull-down assay for analysis of endogenous proteins.
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DOI：
10.1088/1478-3975/ab0792
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发表时间：
2019-03-22
期刊：
影响因子：
2
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
单分子下拉（SiMPull）分析在生理条件下从细胞或组织裂解物中分析分子复合物。目前，这种方法需要一个漫长的样品制备过程，这在很大程度上阻碍了这种技术在生物分析中的广泛采用。在这里，我们提出了一个简化的SiMPull分析的基础上二氯二甲基硅烷-吐温-20钝化和F（ab）片段标记。我们的钝化过程比大多数单分子研究中使用的标准聚乙二醇钝化过程短得多。使用F（ab）片段而不是二价F（ab′）2或完整IgG抗体进行间接荧光标记，允许检测抗体的预孵育，从而减少单分子免疫沉淀样品的样品制备时间。我们研究了我们的方法的适用性，重组蛋白和内源性蛋白从哺乳动物细胞裂解物。
The single-molecule pull-down (SiMPull) assay analyzes molecular complexes in physiological conditions from cell or tissue lysates. Currently the approach requires a lengthy sample preparation process, which has largely prevented the widespread adoption of this technique in bioanalysis. Here, we present a simplified SiMPull assay based upon dichlorodimethylsilane – Tween-20 passivation and F(ab) fragment labeling. Our passivation is a much shorter process than the standard polyethylene glycol passivation used in most single-molecule studies. The use of F(ab) fragments for indirect fluorescent labeling rather than divalent F(ab′)2 or whole IgG antibodies allows for the pre-incubation of the detection antibodies, reducing the sample preparation time for single-molecule immunoprecipitation samples. We examine the applicability of our approach to recombinant proteins and endogenous proteins from mammalian cell lysates.
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影响因子：
48
作者：
Hua, Boyang;Han, Kyu Young;Zhou, Ruobo;Kim, Hajin;Shi, Xinghua;Abeysirigunawardena, Sanjaya C.;Jain, Ankur;Singh, Digvijay;Aggarwal, Vasudha;Woodson, Sarah A.;Ha, Taekjip
通讯作者：
Ha, Taekjip
DOI：
10.1083/jcb.201709115
发表时间：
2018-03-05
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Pleiner T;Bates M;Görlich D
通讯作者：
Görlich D
DOI：
10.1016/j.ymeth.2016.03.022
发表时间：
2016-08-01
期刊：
Methods (San Diego, Calif.)
影响因子：
--
作者：
Fareh M;Loeff L;Szczepaniak M;Haagsma AC;Yeom KH;Joo C
通讯作者：
Joo C
影响因子：
62.1
作者：
von Diezmann L;Shechtman Y;Moerner WE
通讯作者：
Moerner WE
影响因子：
64.8
作者：
通讯作者：
--