An improved radioreceptor assay for 1,25-dihydroxyvitamin D in human plasma.
An improved radioreceptor assay for 1,25-dihydroxyvitamin D in human plasma.
复制标题
人血浆中 1,25-二羟基维生素 D 的改进放射性受体测定。
DOI：
10.1016/0003-2697(81)90346-8
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发表时间：
1981
影响因子：
2.9
通讯作者：
Haussler,MR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dokoh,S;Pike,JW;Chandler,JS;Mancini,JM;Haussler,MR
我们描述了一种改良的测定技术，用于定量血浆中的1，25-二羟维生素D。该方法包括使用微型柱（由粒状硅藻土制成）色谱法快速提取激素，然后在高效液相色谱法上进行单步纯化。血浆1，25-二羟基维生素D的定量通过放射性配体受体测定法实现，该测定法采用来自鸡肠的冻干胞质受体蛋白和高比活性1，25-二羟基[3 H]维生素D3（166 Ci/mmol）。一种新的孵育介质，包括乙醇提取物的维生素D缺乏鸡血清产生高特异性结合，提高了放射性测定的精度。结合和游离激素用同等粒度的葡聚糖涂层炭分离。该方法灵敏度为0.5 pg/管，实际检测范围为1-20 pg/管，允许重复测定血浆体积小至0.5 ml的内源性1，25-二羟维生素D。批内和批间变异系数分别为5%和9%，该方法在宽范围的样品稀释度是有效的。应用该测定技术测定了正常青年人（55.2 ± 13.6pg/ml; n = 20）和慢性肾功能衰竭（13.5 ± 5.2pg/ml; n = 9）和原发性甲状旁腺功能亢进（83.3 ± 18 pg/ml; n = 10）患者血浆1，25-二羟维生素D激素浓度。
We describe a modified assay technique for quantitating 1,25-dihydroxyvitamin D in plasma. The method involves a rapid extraction of the hormone using minicolumn (made of granular diatomaceous earth) chromatography followed by single-step purification on high-performance liquid chromatography. Quantitation of plasma 1,25-dihydroxyvitamin D is achieved by a radioligand receptor assay employing lyophilized cytosolic receptor protein from chick intestine and high-specific-activity 1,25-dihydroxy[3H]vitamin D3(166 Ci/mmol). A new incubation medium including an ethanol extract of vitamin D-deficient chick serum yields high specific binding and improves the precision of the radioassay. Bound and free hormone are separated with dextran-coated charcoal of equivalent particle size. The method is sensitive to 0.5 pg/tube with a practical detection range of 1–20 pg/tube, permitting duplicate assay of endogenous 1,25-dihydroxyvitamin D in plasma volumes as small as 0.5 ml. The intra- and interassay coefficient of variation are 5 and 9%, respectively, and the method is valid over a wide-range sample dilution. This assay technique was applied to the measurement of plasma 1,25-dihydroxyvitamin D hormone concentration in normal young adults (55.2 ± 13.6 pg/ml; n = 20) and in patients with chronic renal failure (13.5 ± 5.2 pg/ml; n = 9) and primary hyperparathyroidism (83.3 ± 18 pg/ml; n = 10).
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