Bacteriophage T7 protein kinase: Site of inhibitory autophosphorylation, and use of dephosphorylated enzyme for efficient modification of protein in vitro.
Bacteriophage T7 protein kinase: Site of inhibitory autophosphorylation, and use of dephosphorylated enzyme for efficient modification of protein in vitro.
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DOI：
10.1016/j.pep.2012.08.008
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发表时间：
2012-10
影响因子：
1.6
通讯作者：
Nicholson, Allen W.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gone, Swapna;Nicholson, Allen W.
噬菌体T7编码丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶，其在大肠杆菌感染期间磷酸化多种细胞蛋白。重组T7蛋白激酶（T7 PK）通常以磷酸化形式纯化，表现出中等水平的磷酸转移酶活性。描述了一种提供去磷酸化的T7 PK的方法，其具有增强的磷酸化蛋白质底物的能力，所述蛋白质底物包括翻译起始因子IF 1和核糖核酸酶III的核酸酶结构域。质谱分析鉴定Thr 12为IF 1体外磷酸化的位点。T7 PK在体外对Ser 216进行Mg 2+依赖性自磷酸化，该作用在体内也会被修饰。无法分离假定的自身磷酸化抗性T7 PK Ser 216 Ala突变体表明磷酸转移酶活性的毒性，并表明Ser 216修饰在感染期间限制T7 PK活性的作用。
Bacteriophage T7 encodes a serine/threonine-specific protein kinase that phosphorylates multiple cellular proteins during infection of Escherichia coli. Recombinant T7 protein kinase (T7PK), normally purified in phosphorylated form, exhibits a modest level of phosphotransferase activity. A procedure is described that provides dephosphorylated T7PK with an enhanced ability to phosphorylate protein substrates, including translation initiation factor IF1 and the nuclease domain of ribonuclease III. Mass spectrometric analysis identified Thr12 as the site of IF1 phosphorylation in vitro. T7PK undergoes Mg2+-dependent autophosphorylation on Ser216 in vitro, which also is modified in vivo. The inability to isolate the presumptive autophosphorylation-resistant T7PK Ser216Ala mutant indicates a toxicity of the phosphotransferase activity and suggests a role for Ser216 modification in limiting T7PK activity during infection.
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影响因子：
3.7
作者：
BRUNOVSKIS, I;SUMMERS, WC
通讯作者：
SUMMERS, WC
影响因子：
64.8
作者：
HIRSCHKAUFFMANN, M;HERRLICH, P;SCHWEIGER, M
通讯作者：
SCHWEIGER, M
影响因子：
3.5
作者：
Marchand, I;Nicholson, AW;Dreyfus, M
通讯作者：
Dreyfus, M
影响因子：
2.9
作者：
Sun, WM;Jun, E;Nicholson, AW
通讯作者：
Nicholson, AW
DOI：
10.1073/pnas.71.2.586
发表时间：
1974-01-01
影响因子：
11.1
作者：
RAHMSDORF, HJ;PAI, SH;STUDIER, FW
通讯作者：
STUDIER, FW