Isolation and genomic analysis of the rat polymeric immunoglobulin receptor gene terminal domain and transcriptional control region.
Isolation and genomic analysis of the rat polymeric immunoglobulin receptor gene terminal domain and transcriptional control region.
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大鼠聚合免疫球蛋白受体基因末端结构域和转录控制区的分离和基因组分析。
作者：
E. Fodor;A. Feren;A. Jones
多聚免疫球蛋白受体（pIgR）跨分泌上皮细胞转运伊加和IgM，并且在外部免疫维持中是必需的。我们在这里报告的结构表征的单拷贝大鼠基因分布在30 kb的染色体DNA和分析其转录控制区。RNA测序和基因组分析表明，5'末端区域起源于一个主要（+1）和一个次要位点，产生一个不寻常的124-bp非翻译外显子I，该外显子I与一个小的96-bp起始子ATG（编码外显子II）通过一个7.5-kb内含子分开。pIgR 5'区包含具有丰富的螺旋-环-螺旋（bHLH）顺式元件的结构化启动子，所述顺式元件位于等同的内部-70、-290、-528和以-745为中心的三个元件内。后三个bHLH元件各自出现在-690至-780处的30-bp重复内。瞬时表达试验显示，1.3 kb的5'区足以驱动大鼠原代肝细胞单层培养物、转化的人肝（HepG 2）细胞和乳腺上皮肿瘤细胞系MCF-7中的表达，但在啮齿动物成纤维细胞3 T3细胞系中无活性。从顺序缺失的载体中推导出最小的转录启动子结构域，揭示了足以实现完全活性的+40至-922序列。在该区域内的进一步缺失产生顺式活性的增量损失，表明多个子区域包含延伸的转录控制区。
The polymeric immunoglobulin receptor (pIgR) transports IgA and IgM across secretory epithelial cells and is essential in external immunity maintenance. We report here the structural characterization of the single-copy rat gene distributed over 30 kb of chromosomal DNA and analysis of its transcriptional control region. RNA sequencing and genomic analysis show a 5' terminal region originates at a major (+1) and a minor site producing an unusual 124-bp nontranslated exon I separated from a small 96-bp initiator ATG coding exon II by a 7.5-kb intron. The pIgR 5' region comprises a structured promoter with abundant helix-loop-helix (bHLH) cis elements positioned within an equivalent internal -70, -290, -528, and three centered at -745. The three latter bHLH elements each occur within 30-bp repeats at -690 to -780. Transient expression assays show a 1.3-kb 5' region is sufficient to drive expression in rat primary hepatocyte monolayer cultures, transformed human hepatic (HepG2) cells, and a mammary epithelial tumor cell line MCF-7, but is inactive in the rodent fibroblast 3T3 cell line. A minimal transcriptional promoter domain was deduced from sequentially deleted vectors revealing a +40 to -922 sequence to be sufficient for full activity. Further deletions within this region yield incremental losses in cis activity, indicating that multiple subregions comprise an extended transcriptional control region.
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