Mutational analysis of centromere DNA from chromosome VI of Saccharomyces cerevisiae.
Mutational analysis of centromere DNA from chromosome VI of Saccharomyces cerevisiae.
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酿酒酵母 VI 号染色体着丝粒 DNA 的突变分析。
DOI：
10.1128/mcb.8.6.2523-2535.1988
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发表时间：
1988
影响因子：
5.3
通讯作者：
Hieter,P
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hegemann,JH;Shero,JH;Cottarel,G;Philippsen,P;Hieter,P
酿酒酵母着丝粒DNA序列由三个不同的着丝粒DNA序列元件(CDEI、CDEII和CDEIII)组成。我们在体外产生了一系列26个CEN突变(包括22个点突变、3个插入和1个缺失)，并利用新的载体系统测试了它们对有丝分裂染色体分离的影响。构建了酵母转化载体pYCF5，将野生型和突变型CENDNAs导入到有丝分裂稳定和非必需的大的线性染色体片段上。CDEI中的六个点突变显示每个细胞分裂的染色体丢失事件的发生率增加了2到10倍。CDEIII中的20个突变显示出从野生型(10-4)到非功能性(>；10-1)的染色体损失率。这些结果直接确定了CDEI和CDEIII中指定功能着丝粒所需的核苷酸，并表明单个碱基的保守程度并不一定反映其在有丝分裂CEN功能中的重要性。
Saccharomyces cerevisiaecentromeres have a characteristic 120-base-pair region consisting of three distinct centromere DNA sequence elements (CDEI, CDEII, and CDEIII). We have generated a series of 26CENmutations in vitro (including 22 point mutations, 3 insertions, and 1 deletion) and tested their effects on mitotic chromosome segregation by using a new vector system. The yeast transformation vector pYCF5 was constructed to introduce wild-type and mutantCENDNAs onto large, linear chromosome fragments which are mitotically stable and nonessential. Six point mutations in CDEI show increased rates of chromosome loss events per cell division of 2- to 10-fold. Twenty mutations in CDEIII exhibit chromosome loss rates that vary from wild type (10-4) to nonfunctional (>10-1). These results directly identify nucleotides within CDEI and CDEIII that are required for the specification of a functional centromere and show that the degree of conservation of an individual base does not necessarily reflect its importance in mitoticCENfunction.
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H. Roman