Orthogonal Versatile Interacting Peptide Tags for Imaging Cellular Proteins.
Orthogonal Versatile Interacting Peptide Tags for Imaging Cellular Proteins.
复制标题
DOI：
10.1021/acs.biochem.2c00712
复制
发表时间：
2023-06-06
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Beatty, Kimberly E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Suyama, Alexa;Devlin, Kaylyn L.;Macias-Contreras, Miguel;Doh, Julia K.;Shinde, Ujwal;Beatty, Kimberly E.
基因标签是研究细胞蛋白质功能、定位和相互作用的变革性工具。今天的大多数研究都依赖于选择性标记一种以上的蛋白质，以获得有关蛋白质原位行为的全面信息。一些蛋白质可以通过融合到蛋白质标签（例如绿色荧光蛋白、HaloTag或SNAP-Tag）来分析。其他蛋白质受益于通过小肽标签的标记，如最近报道的多功能相互作用肽（VIP）标签。VIP标签使得能够用明亮的荧光团或纳米颗粒观察蛋白质定位和运输。在这里，我们通过提供两个新的标签来扩展VIP工具包：TinyVIPER和PunyVIPER。这两个标签被设计用于与MiniVIPER一起使用，用于在细胞中一次标记多达三种不同的蛋白质。标记通过形成高亲和力、生物相容性异二聚体卷曲螺旋介导。每个标签通过荧光显微镜进行验证，包括观察转铁蛋白受体1在活细胞中的运输。我们验证了通过每个标签进行标记对于单色或双色成像具有高度特异性。最后，自分选标签用于同时标记三种蛋白质靶标（即，TOMM 20，组蛋白2B和肌动蛋白）在固定的细胞，突出了他们的实用性，显微镜。MiniVIPER、TinyVIPER和PunyVIPER是用于选择性标记细胞蛋白质的小而稳健的肽标签。
Genetic tags are transformative tools for investigating the function, localization, and interactions of cellular proteins. Most studies today are reliant on selective labeling of more than one protein to obtain comprehensive information on a protein’s behavior in situ. Some proteins can be analyzed by fusion to a protein tag, such as green fluorescent protein, HaloTag, or SNAP-Tag. Other proteins benefit from labeling via small peptide tags, such as the recently reported versatile interacting peptide (VIP) tags. VIP tags enable observations of protein localization and trafficking with bright fluorophores or nanoparticles. Here, we expand the VIP toolkit by presenting two new tags: TinyVIPER and PunyVIPER. These two tags were designed for use with MiniVIPER for labeling up to three distinct proteins at once in cells. Labeling is mediated by the formation of a high-affinity, biocompatible heterodimeric coiled coil. Each tag was validated by fluorescence microscopy, including observation of transferrin receptor 1 trafficking in live cells. We verified that labeling via each tag is highly specific for one- or two-color imaging. Last, the self-sorting tags were used for simultaneous labeling of three protein targets (i.e., TOMM20, histone 2B, and actin) in fixed cells, highlighting their utility for multicolor microscopy. MiniVIPER, TinyVIPER, and PunyVIPER are small and robust peptide tags for selective labeling of cellular proteins.
登录
查看更多内容
影响因子：
4.1
作者：
Kantner T;Alkhawaja B;Watts AG
通讯作者：
Watts AG
影响因子：
16.1
作者：
Chen, Xiaoying;Zaro, Jennica L.;Shen, Wei-Chiang
通讯作者：
Shen, Wei-Chiang
影响因子：
16.6
作者：
Adhikari S;Nice EC;Deutsch EW;Lane L;Omenn GS;Pennington SR;Paik YK;Overall CM;Corrales FJ;Cristea IM;Van Eyk JE;Uhlén M;Lindskog C;Chan DW;Bairoch A;Waddington JC;Justice JL;LaBaer J;Rodriguez H;He F;Kostrzewa M;Ping P;Gundry RL;Stewart P;Srivastava S;Srivastava S;Nogueira FCS;Domont GB;Vandenbrouck Y;Lam MPY;Wennersten S;Vizcaino JA;Wilkins M;Schwenk JM;Lundberg E;Bandeira N;Marko-Varga G;Weintraub ST;Pineau C;Kusebauch U;Moritz RL;Ahn SB;Palmblad M;Snyder MP;Aebersold R;Baker MS
通讯作者：
Baker MS
影响因子：
0.8
作者：
Doh, Julia K.;Enns, Caroline A.;Beatty, Kimberly E.
通讯作者：
Beatty, Kimberly E.
影响因子：
5.6
作者：
Burkhard, P;Ivaninskii, S;Lustig, A
通讯作者：
Lustig, A