Fluorescence detection of hyaluronidase.
Fluorescence detection of hyaluronidase.
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DOI：
10.1016/j.jphotobiol.2011.06.003
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发表时间：
2011-09-02
影响因子：
5.4
通讯作者：
Gryczynski, Lgnacy
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Fudala, Rafal;Mummert, Mark E.;Gryczynski, Zygmunt;Gryczynski, Lgnacy
用荧光素胺和罗丹明B胺两种荧光团标记透明质酸(HA)。这两个荧光团适合于荧光(Foerster)共振能量转移(FRET)，这会导致荧光素猝灭和罗丹明发射增强。这种标记的HA(HA-FRET)是一种潜在的HA降解传感器。我们研究了透明质酸酶(HA-ASE)存在和不存在的情况下HA-FRET的荧光性质。时间分辨荧光测量表明，在没有HA酶的情况下，FRET超过50%。在HA-ase存在下，FRET随着时间的延长而减少，荧光素和罗丹明的相对荧光强度向荧光素转移，表明FRET释放。HA酶消化HA的动力学依赖于酶的浓度。我们证明，同时测量HA-FRET的绿色和红色发射可以用于HA-ASE存在和活性的比率度量检测。这反过来又可用于构建坚固但可靠的HA-ASE传感设备。
We labeled hyaluronan (HA) with two fluorophores, fluorescein amine and rhodamine B amine. These two fluorophores are suitable for a fluorescence (Foerster) resonance energy transfer (FRET) which results in a fluorescein quenching and an enhanced rhodamine emission. Such labeled HA (HA-FRET) is a potential sensor for HA degradation. We studied fluorescence properties of HA-FRET in the absence and presence of hyaluronidase enzyme (HA-ase). The time-resolved fluorescence measurements indicate more than 50% of FRET in the absence of HA-ase. In the presence of HA-ase FRET decreases with time, and relative fluorescence intensities of fluorescein and rhodamine shifts to fluorescein indicating a release of FRET. The kinetics of the digestion process of HA by HA-ase depends on the concentration of the enzyme. We demonstrate that simultaneous measurements of green and red emission of HA-FRET can be used in ratio metric detection of the HA-ase presence and activity. This in turn, can be utilized for the construction of a robust but reliable HA-ase sensing device.
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影响因子：
2.9
作者：
Zhang, Li-Shu;Mummert, Mark E.
通讯作者：
Mummert, Mark E.
DOI：
10.1073/pnas.93.15.7832
发表时间：
1996-07-23
影响因子：
11.1
作者：
Liu, DC;Pearlman, E;Sy, MS
通讯作者：
Sy, MS
影响因子：
4.8
作者：
Tammi, R;MacCallum, D;Tammi, M
通讯作者：
Tammi, M
影响因子：
4.8
作者：
Tammi, R;Rilla, K;Tammi, M
通讯作者：
Tammi, M
影响因子：
--
作者：
Godin, DA;Fitzpatrick, PC;Beckman, BS
通讯作者：
Beckman, BS