Endogenous reverse transcriptase assays reveal synergy between combinations of the M184V and other drug resistance-conferring mutations in interactions with nucleoside analog triphosphates.
Endogenous reverse transcriptase assays reveal synergy between combinations of the M184V and other drug resistance-conferring mutations in interactions with nucleoside analog triphosphates.
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内源逆转录酶测定揭示了 M184V 和其他耐药突变的组合在与核苷类似物三磷酸相互作用中的协同作用。
DOI：
--
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发表时间：
1998
影响因子：
5.6
通讯作者：
M. A. Wainberg
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Y. Quan;Zhengxian Gu;Zhengxian Gu;Xuguang Li;Xuguang Li;Chen Liang;M. Parniak;M. Parniak;M. A. Wainberg;M. A. Wainberg
HIV-1逆转录酶(RT)对核苷类似物(如AZT、ddC和3TC)的抗性是由RT分子上的各种氨基酸取代或其组合所致。分别对3TC和ddC产生高水平和低水平抗性的M184V突变，当被引入RT时，可以在AZT耐药的背景下恢复对AZT的敏感性。K65R突变对3TC和ddC都具有低水平的耐药性，也可以恢复对AZT的敏感性。这一信息在选择临床使用的抗病毒药物组合时具有潜在的实用价值。为了进一步探讨这一问题，我们使用内源性RT反应来研究包含M184V单独或M184V与K65R、E89G或两者都有M41L和T215Y替换的突变病毒。内源性检测的优点是在反应混合物中利用基因组RNA作为模板，反应混合物包括tRNALys.3和病毒核衣壳蛋白，这是特定启动逆转录所必需的，以及可能影响这一过程的所有其他病毒蛋白。我们现在发现，同时含有M184V和K65R的病毒对3TC三磷酸(3TCTP)表现出协同抗性，而同一组合对ddC三磷酸(DdCTP)的抗性水平与单独使用K65R表现出的水平相同。M184V和E89G的组合对ddCTP表现出协同抗性，但对3TCTP没有协同抗性，而只含有E89G的病毒对3TCTP表现出高度抗性，对ddCTP表现出低水平的抗性。结果表明，内源性RT检测在药物敏感性方面可以表现出不同的协同、拮抗或中性效应，这取决于RT本身中特定氨基酸替代的存在。
Resistance of HIV-1 reverse transcriptase (RT) to nucleoside analogs (e.g. AZT, ddC and 3TC) is conferred by various amino acid substitutions or combinations thereof on the RT molecule. The M184V mutation, that confers high and low-level resistance to 3TC and ddC, respectively, can restore sensitivity to AZT when introduced into RT against a background of AZT-resistance. The K65R mutation, that confers low level resistance to both 3TC and ddC, can also restore sensitivity to AZT. This information is of potential utility in choosing combinations of anti-viral drugs for clinical use. To explore this subject further, we have used an endogenous RT reaction to study mutated viruses containing M184V alone or M184V combined with each of the K65R, E89G or both the M41L and T215Y substitutions. Endogenous assays possess the advantage of utilizing genomic RNA as template in a reaction mixture that includes each of tRNALys.3 and viral nucleocapsid protein, necessary for specific initiation of reverse transcription, as well as all other viral proteins that might impact on this process. We now show that viruses containing both M184V and K65R displayed synergistic resistance to 3TC triphosphate (3TCTP), while the same combination yielded the same level of resistance to ddC triphosphate (ddCTP) as that manifested by K65R alone. The combination of M184V and E89G displayed synergistic resistance against ddCTP but not 3TCTP, while viruses containing only E89G were highly resistant to 3TCTP and displayed low-level resistance to ddCTP. The results show that endogenous RT assays can reveal variable synergistic, antagonistic, or neutral effects in regard to drug sensitivity, depending on the presence of specific amino acid substitutions in RT itself.
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