Targeted gene suppression by inducing de novo DNA methylation in the gene promoter.
Targeted gene suppression by inducing de novo DNA methylation in the gene promoter.
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通过在基因启动子中诱导 DNA 从头甲基化来抑制靶向基因
DOI：
10.1186/1756-8935-7-20
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发表时间：
2014
影响因子：
3.9
通讯作者：
Hu JF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ma AN;Wang H;Guo R;Wang YX;Li W;Cui J;Wang G;Hoffman AR;Hu JF
研究背景靶向基因沉默是药物开发和基础研究的重要方法。然而，有效抑制因子的选择已成为该方法实现最大基因抑制的重大障碍。我们试图通过结合通过不同表观遗传机制发挥作用的两个抑制因子的活性来构建“超级抑制因子”。结果通过将 GAL4 DNA 结合域与表观遗传抑制因子融合来构建基因靶向载体，其中包括 CpG DNA 甲基化酶 Sss1、组蛋白 H3 赖氨酸 27 甲基化酶 vSET 域和 Kruppel 相关抑制盒 (KRAB)。我们发现 Sss1 和 KRAB 抑制因子均显着抑制荧光素酶和 copGFP 报告基因的表达。然而，组蛋白 H3 赖氨酸 27 甲基化酶 vSET 在此系统中并未表现出明显的抑制作用。同时含有 Sss1 和 KRAB 的构建体显示出比单独其中任何一种更好的抑制作用。此外，我们还发现 KRAB 通过改变组蛋白密码来抑制基因表达，但不改变基因启动子中的 DNA 甲基化。另一方面，Sss1不仅诱导DNA从头甲基化并招募异染色质蛋白1（HP1a），而且还增加启动子中的H3K27和H3K9甲基化。结论表观遗传学研究可以为构建靶向基因沉默治疗载体时选择抑制子提供有用的数据。
BackgroundTargeted gene silencing is an important approach in both drug development and basic research. However, the selection of a potent suppressor has become a significant hurdle to implementing maximal gene inhibition for this approach. We attempted to construct a ‘super suppressor’ by combining the activities of two suppressors that function through distinct epigenetic mechanisms.ResultsGene targeting vectors were constructed by fusing a GAL4 DNA-binding domain with a epigenetic suppressor, including CpG DNA methylase Sss1, histone H3 lysine 27 methylase vSET domain, and Kruppel-associated suppression box (KRAB). We found that both Sss1 and KRAB suppressors significantly inhibited the expression of luciferase and copGFP reporter genes. However, the histone H3 lysine 27 methylase vSET did not show significant suppression in this system. Constructs containing both Sss1 and KRAB showed better inhibition than either one alone. In addition, we show that KRAB suppressed gene expression by altering the histone code, but not DNA methylation in the gene promoter. Sss1, on the other hand, not only induced de novo DNA methylation and recruited Heterochromatin Protein 1 (HP1a), but also increased H3K27 and H3K9 methylation in the promoter.ConclusionsEpigenetic studies can provide useful data for the selection of suppressors in constructing therapeutic vectors for targeted gene silencing.
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影响因子：
14.9
作者：
Li T;Huang S;Jiang WZ;Wright D;Spalding MH;Weeks DP;Yang B
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作者：
Hu, JF;Vu, TH;Hoffman, AR
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Gräslund, T;Li, XL;Barbas, CF
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