Removal of HIV DNA by CRISPR from Patient Blood Engrafts in Humanized Mice.
Removal of HIV DNA by CRISPR from Patient Blood Engrafts in Humanized Mice.
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DOI：
10.1016/j.omtn.2018.05.021
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发表时间：
2018-09-07
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Khalili K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bella R;Kaminski R;Mancuso P;Young WB;Chen C;Sariyer R;Fischer T;Amini S;Ferrante P;Jacobson JM;Kashanchi F;Khalili K
我们使用 NOD/SCID 小鼠（也称为 NRG）来评估慢病毒介导的静脉注射 CRISPR 编辑来自循环 PBMC 移植物的 HIV-1 基因组的能力，其中一些移植物位于几种动物实体组织中。慢病毒介导的多重向导RNA伴随Cas9核酸内切酶的递送，导致从嵌入NRG小鼠脾脏中的体外感染的人外周血单核细胞（PBMC）中切除位于HIV-1 LTR内的病毒基因组的目标区域。同样，用治疗性慢病毒治疗携带来自 HIV-1 阳性患者的 PBMC 移植物的 NRG 小鼠，消除了移植动物血液以及脾、肺和肝脏中病毒 DNA 片段的存在。用表达 Cas9 和 gRNA 的慢病毒载体处理后，对病毒 DNA 进行 Sanger 序列分析，验证了原病毒 DNA 片段在预测位点从病毒基因组中的编辑和去除。这项概念验证研究首次证明，在用表达慢病毒的 CRISPR 治疗后，可以成功地从植入人源化小鼠的患者免疫细胞中切除 HIV-1 前病毒 DNA，并导致具有复制能力的病毒水平下降。
We used NOD/SCID mice, also known as NRG, to assess the ability of lentivirus-mediated intravenous delivery of CRISPR in editing the HIV-1 genome from the circulating PBMC engrafts, some of which homed within several animal solid tissues. Lentivirus-mediated delivery of a multiplex of guide RNAs accompanied by Cas9 endonuclease led to the excision of the targeted region of the viral genome positioned within the HIV-1 LTR from the in-vitro-infected human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) embedded in the spleens of NRG mice. Similarly, the treatment of NRG mice harboring PBMC engrafts derived from HIV-1-positive patients with the therapeutic lentivirus eliminated the presence of the viral DNA fragment in the blood, as well as in the spleen, lung, and liver, of the engrafted animals. Sanger sequence analysis of the viral DNA after treatment with the lentiviral vectors expressing Cas9 and gRNAs verified the editing and removal of the proviral DNA fragment from the viral genome at the predicted sites. This proof-of-concept study, for the first time, demonstrates successful excision of the HIV-1 proviral DNA from patient immune cell engrafts in humanized mice upon treatment with lentivirus-expressing CRISPR and causes a decline in the level of replication-competent virus.
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DOI：
10.1084/jem.20121932
发表时间：
2013-01-14
期刊：
The Journal of experimental medicine
影响因子：
--
作者：
Perreau M;Savoye AL;De Crignis E;Corpataux JM;Cubas R;Haddad EK;De Leval L;Graziosi C;Pantaleo G
通讯作者：
Pantaleo G
DOI：
10.1073/pnas.94.24.13193
发表时间：
1997-11-25
影响因子：
11.1
作者：
Chun, TW;Stuyver, L;Fauci, AS
通讯作者：
Fauci, AS
影响因子：
16.6
作者：
Liao, Hsin-Kai;Gu, Ying;Belmonte, Juan Carlos Izpisua
通讯作者：
Belmonte, Juan Carlos Izpisua
影响因子：
4.8
作者：
Sampey, Gavin C.;Saifuddin, Mohammed;Kashanchi, Fatah
通讯作者：
Kashanchi, Fatah
DOI：
10.1126/science.1232033
发表时间：
2013-02-15
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Mali P;Yang L;Esvelt KM;Aach J;Guell M;DiCarlo JE;Norville JE;Church GM
通讯作者：
Church GM