A High‐Throughput Absolute Quantification of Protein‐Bound Sulfur Amino Acids from Model and Crop Plant Seeds
A High‐Throughput Absolute Quantification of Protein‐Bound Sulfur Amino Acids from Model and Crop Plant Seeds
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对模型和作物种子中的蛋白质结合硫氨基酸进行高通量绝对定量
DOI：
10.1002/cpz1.861
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Angelovici, Ruthie
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yobi, Abou;Ansaf, Huda;Angelovici, Ruthie
在这个过程中，我们描述了一个高通量的绝对定量协议的蛋白质结合的含硫氨基酸，半胱氨酸（Cys）和蛋氨酸（Met），从植物种子。该程序包括过甲酸氧化，将结合的Cys转化为半胱氨酸（CysA），将结合的Met转化为甲硫氨酸砜（MetS），然后酸水解。通过多反应监测串联质谱法（LC-MS/MS）进行绝对定量步骤。该方法通过使用96孔板提取装置每周分析数百份样品。重要的是，该方法每个样本仅使用约4 mg组织，并使用常见的酸水解方案，然后进行水提取，其中包括DL-Ser-d3和L-Met-d3作为内标物，以实现高精度、准确度和重现性的蛋白结合Cys和Met的绝对水平的定量。本文所述的方案已经针对来自拟南芥、大豆和玉米的种子样品进行了优化，但也可以应用于其他植物组织。© 2023 Wiley Periodicals LLC.基本方案：分析种子中的蛋白结合半胱氨酸和蛋氨酸
In this procedure, we describe a high‐throughput absolute quantification protocol for the protein‐bound sulfur amino acids, cysteine (Cys) and methionine (Met), from plant seeds. This procedure consists of performic acid oxidation that transforms bound Cys into cysteic acid (CysA) and bound Met into methionine sulfone (MetS) followed by acid hydrolysis. The absolute quantification step is performed by multiple reaction monitoring tandem mass spectrometry (LC‐MS/MS). The approach facilitates the analysis of a few hundred samples per week by using a 96‐well plate extraction setup. Importantly, the method uses only ∼4 mg of tissue per sample and uses the common acid hydrolysis protocol, followed by water extraction that includes DL‐Ser‐d3 and L‐Met‐d3 as internal standards to enable the quantification of the absolute levels of the protein‐bound Cys and Met with high precision, accuracy, and reproducibility. The protocol described herein has been optimized for seed samples fromArabidopsis thaliana,Glycine max, andZea maysbut could be applied to other plant tissues. © 2023 Wiley Periodicals LLC.Basic Protocol: Analysis of protein‐bound cysteine and methionine from seeds
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DOI：
10.1021/jp512440z
发表时间：
2015
期刊：
The journal of physical chemistry. C, Nanomaterials and interfaces
影响因子：
--
作者：
Siriwardana K;Wang A;Gadogbe M;Collier WE;Fitzkee NC;Zhang D
通讯作者：
Zhang D
评估淡水物种中氨基酸定量的过甲酸氧化方法
DOI：
10.1002/lom3.10284
发表时间：
2018
期刊：
Limnology and Oceanography: Methods
影响因子：
--
作者：
Jennifer C. Thera;K. Kidd;Matthew G. Nosworthy;R. Bertolo
通讯作者：
R. Bertolo
影响因子：
--
作者：
Rutherfurd, Shane M;Gilani, G Sarwar
通讯作者：
Gilani, G Sarwar
影响因子：
5.1
作者：
Kambhampati, Shrikaar;Li, Jia;Allen, Doug K.
通讯作者：
Allen, Doug K.
影响因子：
7.2
作者：
Merrick, William C.;Pavitt, Graham D.
通讯作者：
Pavitt, Graham D.