Single/low-copy integration of transgenes in Caenorhabditis elegans using an ultraviolet trimethylpsoralen method.
Single/low-copy integration of transgenes in Caenorhabditis elegans using an ultraviolet trimethylpsoralen method.
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DOI：
10.1186/1472-6750-12-1
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发表时间：
2012-01-05
影响因子：
3.5
通讯作者：
Mitani S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kage-Nakadai E;Kobuna H;Funatsu O;Otori M;Gengyo-Ando K;Yoshina S;Hori S;Mitani S
秀丽隐杆线虫的转基因菌株通常是通过将DNA注入生殖系形成多拷贝染色体外阵列而产生的。这些转基因是半稳定的，它们在生殖系中的表达是沉默的。已经开发了Mos1转座子或微粒子轰击方法来创建单拷贝或低拷贝的染色体整合系。在这里，我们报告了一种使用紫外线三甲基补骨脂素(UV/TMP)产生单拷贝/低拷贝基因整合的替代方法。我们利用基于温度敏感性的正选择和基于苯并咪唑敏感性的阴性选择，成功地整合了来自染色体外阵列的低拷贝转基因。我们证实整合子在生殖系中表达转基因。定量聚合酶链式反应显示，用这种方法产生的菌株含有单拷贝或低拷贝转基因。此外，用Cre重组酶基因显微注射技术切除了位于loxP位点两侧的正选择标记基因，首次证实了Cre介导的线虫染色体切除。我们的UV/TMP整合方法，基于常见的染色体外转基因，为产生单拷贝/低拷贝基因整合提供了一种有用的方法。
Transgenic strains of Caenorhabditis elegans are typically generated by injecting DNA into the germline to form multi-copy extrachromosomal arrays. These transgenes are semi-stable and their expression is silenced in the germline. Mos1 transposon or microparticle bombardment methods have been developed to create single- or low-copy chromosomal integrated lines. Here we report an alternative method using ultraviolet trimethylpsoralen (UV/TMP) to generate single/low-copy gene integrations. We successfully integrated low-copy transgenes from extrachromosomal arrays using positive selection based on temperature sensitivity with a vps-45 rescue fragment and negative selection based on benzimidazole sensitivity with a ben-1 rescue fragment. We confirmed that the integrants express transgenes in the germline. Quantitative PCR revealed that strains generated by this method contain single- or low-copy transgenes. Moreover, positive selection marker genes flanked by LoxP sites were excised by Cre recombinase mRNA microinjection, demonstrating Cre-mediated chromosomal excision for the first time in C. elegans. Our UV/TMP integration method, based on familiar extrachromosomal transgenics, provides a useful approach for generating single/low-copy gene integrations.
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DOI：
10.1006/bbrc.2000.2260
发表时间：
2000-03-05
影响因子：
3.1
作者：
Gengyo-Ando, K;Mitani, S
通讯作者：
Mitani, S
DOI：
10.1016/0027-5107(91)90131-7
发表时间：
1991-07-01
期刊：
MUTATION RESEARCH
影响因子：
--
作者：
STEWART, HI;ROSENBLUTH, RE;BAILLIE, DL
通讯作者：
BAILLIE, DL
影响因子：
3.7
作者：
Zeiser E;Frøkjær-Jensen C;Jorgensen E;Ahringer J
通讯作者：
Ahringer J
影响因子：
10.5
作者：
WAY, JC;WANG, L;WANG, A
通讯作者：
WANG, A
DOI：
10.1073/pnas.91.4.1381
发表时间：
1994-02-15
影响因子：
11.1
作者：
YANDELL, MD;EDGAR, LG;WOOD, WB
通讯作者：
WOOD, WB