NaNuTrap: a technique for in vivo cell nucleus labelling using nanobodies.
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DOI：
10.1242/dev.199822
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发表时间：
2021-09-15
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体内细胞标记在快速发育过程中是具有挑战性的，因为许多细胞类型的分化速度比荧光蛋白的成熟时间更快，使得用标准技术无法显示这些组织。在这里，我们提出了一种基于纳米体的方法，纳米体核陷阱(NaNuTrap)，它与果蝇现有的Gal4/UAS系统一起工作，允许在体内早期标记细胞核，而不依赖于荧光蛋白的成熟时间。这恢复了成熟时间更长的荧光蛋白的效用，例如用于双光子成像的荧光蛋白，用于快速或非常早期的发育过程的实时成像。我们还介绍了该系统的一个更广泛的应用，即NaNuTrap可以将任何现有转基因苍蝇系中表达的细胞质GFP转换为核标记。荧光信号的这种核重新定位可以提高GFP标记的实用性，例如在细胞计数中，以及导致活的荧光信号的强度的一般增加。我们通过在与原肠形成相关的快速运动期间有效地跟踪细胞亚群来展示NaNuTrap的这些能力。摘要：一种基于纳米体的方法，NaNuTrap，允许在体内早期标记细胞核，而不依赖于荧光蛋白的成熟时间，并用于将细胞质GFP表达株转化为核标记株。
In vivo cell labelling is challenging in fast developmental processes because many cell types differentiate more quickly than the maturation time of fluorescent proteins, making visualization of these tissues impossible with standard techniques. Here, we present a nanobody-based method, Nanobody Nuclear Trap (NaNuTrap), which works with the existing Gal4/UAS system in Drosophila and allows for early in vivo cell nuclei labelling independently of the maturation time of the fluorescent protein. This restores the utility of fluorescent proteins that have longer maturation times, such as those used in two-photon imaging, for live imaging of fast or very early developmental processes. We also present a more general application of this system, whereby NaNuTrap can convert cytoplasmic GFP expressed in any existing transgenic fly line into a nuclear label. This nuclear re-localization of the fluorescent signal can improve the utility of the GFP label, e.g. in cell counting, as well as resulting in a general increase in intensity of the live fluorescent signal. We demonstrate these capabilities of NaNuTrap by effectively tracking subsets of cells during the fast movements associated with gastrulation. Summary: A nanobody-based method, NaNuTrap, allows early in vivo cell nuclei labelling independently of the maturation time of the fluorescent protein and for transforming of cytoplasmic GFP-expressing lines into nuclear-labelled lines.
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