Pulsed-field gel electrophoretic analysis of DNA double-strand breaks in mammalian cells using photostimulable storage phosphor imaging.
Pulsed-field gel electrophoretic analysis of DNA double-strand breaks in mammalian cells using photostimulable storage phosphor imaging.
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使用光刺激存储荧光成像对哺乳动物细胞中 DNA 双链断裂进行脉冲场凝胶电泳分析。
DOI：
10.1080/09553009414550611
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发表时间：
1994
影响因子：
2.6
通讯作者：
Tofilon,PJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Story,MD;Mendoza,EA;Meyn,RE;Tofilon,PJ
采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)结合光刺激存储荧光成像技术，对人结肠癌细胞克隆A的双链断裂(DSB)诱导和修复进行了研究。由于~(14)C-放射性在琼脂糖凝胶中的测定是在电泳法之后进行的，因此不需要对凝胶进行费力的加工、切出感兴趣的区域、液体闪烁计数等，从而节省了人力、时间和成本。荧光屏产生的信号在5个对数上是线性的，并且对低水平的放射性核素暴露很敏感。电泳法测得断裂DNA在凝胶中的迁移量与剂量呈对数线性关系，当照射剂量低至5Gy时，可测量到照射后DSB的重新结合。DSB再结合的动力学参数与实验误差内的初始剂量无关，在5-20Gy值范围内，恢复4h后完成。使用光刺激存储荧光粉成像允许使用低水平的放射性核素掺入在对辐射敏感的哺乳动物细胞中进行DSB分析，这是其他方法所不可能的。
Double-strand break (dsb) induction and repair was determined in the human colon carcinoma cell line clone A using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) coupled with photostimulable storage phosphor imaging technology. Because14C-radioactivity was measured in a dried agarose gel following electrophoresis, no laborious processing of the gel, cutting out regions of interest, liquid scintillation counting, etc., was necessary thereby saving labour, time and cost. The signal generated by phosphor screens was linear over 5 logs and sensitive to low levels of radionuclide exposure. Migration of broken DNA into the gel upon electrophoresis was determined to be log-linear as as a function of dose, and dsb rejoining after irradiation could be measured for exposures as low as 5 Gy. The kinetic parameters of dsb rejoining are independent of the initial dose delivered within experimental error over the range of 5–20 Gy and complete after 4h of recovery. The use of photostimulable storage phosphor imaging allows the use of low levels of radionuclide incorporation for DSB analysis in radiosensitive mammalian cells that would not be possible by other methods.
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