Unexpected transcellular protein crossover occurs during canonical DNA transfection.
Unexpected transcellular protein crossover occurs during canonical DNA transfection.
复制标题
在规范DNA转染期间发生意外的跨细胞蛋白交叉。
DOI：
10.1002/jcb.24884
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发表时间：
2014-12
影响因子：
4
通讯作者：
Davletov, Bazbek
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Arsenault, Jason;Cuijpers, Sabine A. G.;Niranjan, Dhevahi;Davletov, Bazbek
转染DNA对生物科学来说是无价的，但对膜稳态的影响也不容忽视。在这里，我们证明了用Lipofectamine LTX与荧光偶联肉毒杆菌血清型A全酶（EGFP-LcA） cDNA转染的神经2a细胞表达这种SNAP25蛋白酶，一旦翻译，可以逃离转染的宿主细胞质并被内吞到未转染的细胞中，没有其固有的结合和易位结构域。荧光读数显示转染率适中（30-50%），而免疫印迹显示SNAP25的酶切总量令人惊讶；转基因蛋白的作用超出了宿主细胞的范围。使用细胞内染料，没有观察到单独的试剂处理产生重要的细胞毒性作用，这排除了膜破裂的可能性，尽管明显地，细胞内酸性细胞器向质膜重新分布。在试剂处理后，蛋白质渗透性和内体运输的这种剧烈但经常未被观察到的变化突出了所有使用瞬时转染的研究的重要问题。j .细胞。中国生物医学工程学报，2014,31(2):444 - 444。©2014 Wiley期刊公司
Transfection of DNA has been invaluable for biological sciences, yet the effects upon membrane homeostasis are far from negligible. Here, we demonstrate that Neuro2A cells transfected using Lipofectamine LTX with the fluorescently coupled Botulinum serotype A holoenzyme (EGFP-LcA) cDNA express this SNAP25 protease that can, once translated, escape the transfected host cytosol and become endocytosed into untransfected cells, without its innate binding and translocation domains. Fluorescent readouts revealed moderate transfection rates (30–50%) while immunoblotting revealed a surprisingly total enzymatic cleavage of SNAP25; the transgenic protein acted beyond the confines of its host cell. Using intracellular dyes, no important cytotoxic effects were observed from reagent treatment alone, which excluded the possibility of membrane ruptures, though noticeably, intracellular acidic organelles were redistributed towards the plasma membrane. This drastic, yet frequently unobserved, change in protein permeability and endosomal trafficking following reagent treatment highlights important concerns for all studies using transient transfection. J. Cell. Biochem. 115: 2047–2054, 2014. © 2014 Wiley Periodicals, Inc.
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