Axonal actin in action: Imaging actin dynamics in neurons.
Axonal actin in action: Imaging actin dynamics in neurons.
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DOI：
10.1016/bs.mcb.2015.07.003
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发表时间：
2016
影响因子：
--
通讯作者：
Roy S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ladt K;Ganguly A;Roy S
肌动蛋白是一种高度保守的关键细胞骨架蛋白，参与多种结构和功能作用。在神经元中，轴突末端（生长锥）和树突棘中的肌动蛋白已被深入研究，但有关轴突轴中肌动蛋白结构和动力学的细节几十年来仍然模糊。该领域的一个主要障碍是肌动蛋白成像。肌动蛋白以可溶性单体 (G-肌动蛋白) 和肌动蛋白丝 (F-肌动蛋白) 形式存在，使用 GFP/RFP 等传统荧光探针标记肌动蛋白通常会导致弥漫性浑浊，从而难以辨别动力学行为。在最近的一篇出版物中，我们使用 F-肌动蛋白选择性探针来可视化轴突中的肌动蛋白动力学，解决了以前从未描述过的惊人的肌动蛋白行为。然而，使用这些探针来可视化肌动蛋白动力学具有挑战性，因为它们可能导致肌动蛋白丝成束。因此，需要严格优化实验参数。在这里，我们描述了一些与使用这些探针可视化轴突中 F-肌动蛋白动态相关的实用方法细节。
Actin is a highly conserved, key cytoskeletal protein involved in numerous structural and functional roles. In neurons, actin has been intensively investigated in axon terminals—growth cones—and dendritic spines, but details about actin structure and dynamics in axon shafts have remained obscure for decades. A major barrier in the field has been imaging actin. Actin exists as soluble monomers (G-actin) as well as actin filaments (F-actin), and labeling actin with conventional fluorescent probes like GFP/RFP typically leads to a diffuse haze that makes it difficult to discern kinetic behaviors. In a recent publication, we used F-actin selective probes to visualize actin dynamics in axons, resolving striking actin behaviors that have not been described before. However, using these probes to visualize actin dynamics is challenging as they can cause bundling of actin filaments; thus, experimental parameters need to be strictly optimized. Here we describe some practical methodological details related to using these probes for visualizing F-actin dynamics in axons.
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