Assay of protein and peptide adducts of cholesterol ozonolysis products by hydrophobic and click enrichment methods.
Assay of protein and peptide adducts of cholesterol ozonolysis products by hydrophobic and click enrichment methods.
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通过疏水和点击富集方法测定胆固醇臭氧分解产物的蛋白质和肽加合物。
DOI：
10.1021/tx500229h
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发表时间：
2014
影响因子：
4.1
通讯作者：
Porter,NedA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Windsor,Katherine;Genaro-Mattos,ThiagoC;Miyamoto,Sayuri;Stec,DonaldF;Kim,Hye-YoungH;Tallman,KeriA;Porter,NedA
胆固醇经过臭氧化反应生成多种氧化甾醇产物，包括胆固醇-5，6-环氧化物(CholEp)及其异构体--乙二醇乙二醇A(SecoA)和乙二醇乙二醇乙(SecoB)。这些氧化甾醇表现出许多重要的生物活性，包括蛋白质加合；然而，关于这些氧化甾醇修饰的活性物种和蛋白质范围的识别，仍有许多需要了解。在这里，我们合成了胆固醇衍生的氧化甾醇的炔基衍生物，并使用一种直接的检测方法来确定第二甾醇A和B是所测试的氧化甾醇中最具蛋白质活性的。对一种氨基酸、多肽和蛋白质的模型加合研究为第二甾醇脱水产物在蛋白质加合中的潜在作用提供了证据。疏水分离方法萃取法和固相萃取法成功地用于富集氧甾醇加合物的多肽物种，并对一个模型多肽-SECO加合物进行了LC-MS/MS分析，发现该物种具有独特的裂解模式(中性损失390Da)。将疏水富集法与利用特征碎片模式的蛋白质组学分析相结合，有助于鉴定加合物蛋白质中的塞科甾醇修饰的多肽和蛋白质。更广泛地说，这些改进的浓缩方法可以深入了解氧化类固醇和臭氧暴露在各种疾病的发病机制中的作用，包括动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、帕金森病和哮喘。
Cholesterol undergoes ozonolysis to afford a variety of oxysterol products, including cholesterol-5,6-epoxide (CholEp) and the isomeric aldehydes secosterol A (seco A) and secosterol B (seco B). These oxysterols display numerous important biological activities, including protein adduction; however, much remains to be learned about the identity of the reactive species and the range of proteins modified by these oxysterols. Here, we synthesized alkynyl derivatives of cholesterol-derived oxysterols and employed a straightforward detection method to establish secosterols A and B as the most protein-reactive of the oxysterols tested. Model adduction studies with an amino acid, peptides, and proteins provide evidence for the potential role of secosterol dehydration products in protein adduction. Hydrophobic separation methodsFolch extraction and solid phase extraction (SPE)were successfully applied to enrich oxysterol-adducted peptide species, and LC-MS/MS analysis of a model peptide–seco adduct revealed a unique fragmentation pattern (neutral loss of 390 Da) for that species. Coupling a hydrophobic enrichment method with proteomic analysis utilizing characteristic fragmentation patterns facilitates the identification of secosterol-modified peptides and proteins in an adducted protein. More broadly, these improved enrichment methods may give insight into the role of oxysterols and ozone exposure in the pathogenesis of a variety of diseases, including atherosclerosis, Alzheimer’s disease, Parkinson’s disease, and asthma.
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