A rapid strategy to detect the recombined allele in LSL-TβRICA transgenic mice.
A rapid strategy to detect the recombined allele in LSL-TβRICA transgenic mice.
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检测 LSL-TβRICA 转基因小鼠重组等位基因的快速策略。
DOI：
10.1002/dvg.20653
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发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Bartholin,Laurent
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Vincent,DavidF;Kaniewski,Bastien;Powers,ShannonE;Havenar-Daughton,Colin;Marie,JulienC;Wotton,David;Bartholin,Laurent
我们先前已经产生了含有Cre诱导的组成型活性TGF β I型受体的转基因小鼠品系（LSL-TbRICA）（Bartholin等人，2008，Genesis 46：724-731）。转基因表达依赖于位于TbRICA编码序列上游的转录终止子（LSL，Lox-STOP-Lox）的切除。为了评估在Cre重组酶存在下STOP信号的正确切除，我们开发了基于原始PCR基因分型策略的快速筛选。更确切地说，我们设计了一组位于含LSL区域侧翼的引物。扩增产物的大小将根据LSL-TbRICA等位基因的重组状态而不同。实际上，含有STOP的PCR产物的大小为1.93 kb，但当在Cre介导的重组后去除STOP信号时，其减小至0.35 kb。我们使用不同的Cre表达转基因小鼠品系验证了几个隔室中的切除，包括胰腺、肝脏、T淋巴细胞和胚胎。这代表了监测LSL-TbRICA等位基因的组织特异性重组的简单且有效的方式。创世纪48：559-562，2010。Wiley-Liss，Inc.
We have previously generated a transgenic mouse strain (LSL-TbRICA) containing a Cre-inducible constitutively active TGFb type I receptor (Bartholin et al., 2008, Genesis 46: 724–731). Transgene expression depends on the excision of a floxed-transcriptional STOP (LSL, Lox-STOP-Lox) located upstream the TbRICA coding sequence. To evaluate the correct excision of the STOP signal in the presence of Cre-recombinase, we developed a rapid screening based on an original PCR genotyping strategy. More precisely, we designed a set of primers flanking the LSL containing region. The size of the amplified products will differ according to recombination status of the LSL-TbRICA allele. Indeed, the size of the STOP containing PCR product is 1.93 kb, but is reduced to 0.35 kb when the STOP signal is removed after Cre-mediated recombination. We validated excision in several compartments, including pancreas, liver, T lymphocytes, and embryos using different Cre expressing transgenic mouse strains. This represents a simple and efficient way of monitoring the tissue specific recombination of the LSL-TbRICA allele. genesis 48: 559–562, 2010. VVC 2010 Wiley-Liss, Inc.
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