Microfluidic-assisted analysis of replicating DNA molecules.
Microfluidic-assisted analysis of replicating DNA molecules.
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DOI：
10.1038/nprot.2009.54
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发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
14.8
通讯作者：
Monnat, Raymond J., Jr.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sidorova, Julia M.;Li, Nianzhen;Schwartz, David C.;Folch, Albert;Monnat, Raymond J., Jr.
基于单分子的方案作为一种在全球基因组和基因座特异性水平上可视化DNA复制的方式已经越来越受欢迎。这些方案利用了许多生物体在DNA复制过程中掺入核苷类似物的能力，以及在玻璃上显示拉伸DNA用于免疫染色和显微镜检查的方法。我们在这里描述了一个微流控平台，可用于拉伸和捕获标记的DNA分子进行复制分析。该平台由平行阵列的3面、3或4 μm高、可变宽度毛细管通道组成，这些通道由聚甲基硅氧烷（PDMS）通过常规软光刻制成，硅烷改性的玻璃盖玻片可逆地密封通道的开口侧。这些微通道中的毛细管张力有利于DNA加载、拉伸和μ L规模DNA样品的盖玻片沉积。该平台的简单性和可扩展性应有助于使用来自各种生物和临床来源的小样本进行DNA复制分析。
Single molecule-based protocols have been gaining popularity as a way to visualize DNA replication at the global genomic and locus-specific levels. These protocols take advantage of the ability of many organisms to incorporate nucleoside analogs during DNA replication, together with a method for displaying stretched DNA on glass for immunostaining and microscopy. We describe here a microfluidic platform that can be used to stretch and capture labeled DNA molecules for replication analyses. This platform consists of parallel arrays of 3-sided, 3 or 4 μm high, variable width capillary channels fabricated from polymethyl siloxane (PDMS) by conventional soft lithography, and silane-modified glass coverslips to reversibly seal the open side of the channels. Capillary tension in these microchannels facilitates DNA loading, stretching and glass coverslip deposition from μL-scale DNA samples. The simplicity and extensibility of this platform should facilitate DNA replication analyses using small samples from a variety of biological and clinical sources.
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DOI：
10.1073/pnas.55.3.599
发表时间：
1966-01-01
影响因子：
11.1
作者：
HUBERMAN, JA;RIGGS, AD
通讯作者：
RIGGS, AD
影响因子：
64.8
作者：
Alberts, B
通讯作者：
Alberts, B
影响因子：
3.9
作者：
Herrick, J;Bensimon, A
通讯作者：
Bensimon, A
影响因子：
14.8
作者：
Herschleb, Jill;Ananiev, Gene;Schwartz, David C.
通讯作者：
Schwartz, David C.
DOI：
10.1101/sqb.1963.028.01.011
发表时间：
1963-01-01
期刊：
COLD SPRING HARBOR SYMPOSIA ON QUANTITATIVE BIOLOGY
影响因子：
--
作者：
CAIRNS, J
通讯作者：
CAIRNS, J