Novel mutations in Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase increase thermostability through tighter binding to template-primer.
Novel mutations in Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase increase thermostability through tighter binding to template-primer.
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DOI：
10.1093/nar/gkn952
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发表时间：
2009-02
影响因子：
14.9
通讯作者：
Hogrefe, Holly
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Arezi, Bahram;Hogrefe, Holly
为了增加Moloney鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV RT）的热稳定性，我们为变体筛选了随机和位点饱和文库，这些变体显示出对热灭活的抗性的增加。这共同增加了55°C的MMLV RT的半衰期，从少于5分钟到约30分钟，在存在模板纸中，这些突变通过增加五体突变体的特异性活性（M5）。 ）在广泛的cDNA合成温度（25-70°C）中，我们进一步表明，与在高温下使用含有次级的RNA目标相比结构。
In an effort to increase the thermostability of Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase (MMLV RT), we screened random and site-saturation libraries for variants that show increased resistance to thermal inactivation. We discovered five mutations E69K, E302R, W313F, L435G and N454K that collectively increase the half-life of MMLV RT at 55°C from less than 5 min to ∼30 min in the presence of template-primer. In addition, these mutations alter the thermal profile by increasing specific activity of the pentuple mutant (M5) over a broad range of cDNA synthesis temperatures (25–70°C). We further show that M5 generates higher cDNA yields and exhibits better RT–PCR performance compared to wild-type RT when used at high temperature to amplify RNA targets containing secondary structure. Finally, we demonstrate that M5 exhibits tighter binding (lower Km) to template-primer, which likely protects against heat inactivation.
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DOI：
10.1073/pnas.90.13.6320
发表时间：
1993-07-01
影响因子：
11.1
作者：
JACOBOMOLINA, A;DING, JP;ARNOLD, E
通讯作者：
ARNOLD, E
DOI：
10.1038/newbio234240a0
发表时间：
1971-01-01
期刊：
NATURE-NEW BIOLOGY
影响因子：
--
作者：
MOLLING, K;BOLOGNESI, DP;HAUSEN, P
通讯作者：
HAUSEN, P
DOI：
10.1093/protein/11.9.739
发表时间：
1998-09-01
期刊：
PROTEIN ENGINEERING
影响因子：
--
作者：
Shindyalov, IN;Bourne, PE
通讯作者：
Bourne, PE
影响因子：
16.6
作者：
Sauter, Katharina B. M.;Marx, Andreas
通讯作者：
Marx, Andreas
影响因子：
2.7
作者：
Hogrefe, HH;Cline, J;Allen, RM
通讯作者：
Allen, RM