Revealing hidden complexities of genomic rearrangements generated with Cas9.

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DOI:
10.1038/s41598-017-12740-6
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发表时间:
2017-10-09
期刊:
影响因子:
4.6
通讯作者:
Bradley A
Bradley A
中科院分区:
综合性期刊3区
文献类型:
--
作者:
Boroviak K;Fu B;Yang F;Doe B;Bradley A

文献摘要

参考文献

被引文献

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自从CRISPR/CAS9在哺乳动物系统中使用以来,对由大的基因组重排引起的人类疾病进行建模变得更加容易。在之前的一项研究中,我们证明了通过将CRISPR/Cas9试剂直接注射到小鼠受精卵中,可以产生多达100万个碱基对的基因组重排。虽然这些重排是通过连接PCR确定的,但我们在这里描述了各种意想不到的结构变化,通常涉及由编辑基因座附近的gRNA划分的区域的重新整合。我们在这里说明了高分辨率纤维FISH检测到的一些多样性,并得出结论,需要进行广泛的分子分析才能完全理解Cas9产生的工程染色体的结构。
Modelling human diseases caused by large genomic rearrangements has become more accessible since the utilization of CRISPR/Cas9 in mammalian systems. In a previous study, we showed that genomic rearrangements of up to one million base pairs can be generated by direct injection of CRISPR/Cas9 reagents into mouse zygotes. Although these rearrangements are ascertained by junction PCR, we describe here a variety of unanticipated structural changes often involving reintegration of the region demarcated by the gRNAs in the vicinity of the edited locus. We illustrate here some of this diversity detected by high-resolution fibre-FISH and conclude that extensive molecular analysis is required to fully understand the structure of engineered chromosomes generated by Cas9.
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