BAC TransgeneOmics: a high-throughput method for exploration of protein function in mammals.
BAC TransgeneOmics: a high-throughput method for exploration of protein function in mammals.
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DOI：
10.1038/nmeth.1199
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发表时间：
2008-05
期刊：
影响因子：
48
通讯作者：
Hyman, Anthony A.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Poser, Ina;Sarov, Mihail;Hutchins, James R. A.;Heriche, Jean-Karim;Toyoda, Yusuke;Pozniakovsky, Andrei;Weigl, Daniela;Nitzsche, Anja;Hegemann, Bjoern;Bird, Alexander W.;Pelletier, Laurence;Kittler, Ralf;Hua, Sujun;Naumann, Ronald;Augsburg, Martina;Sykora, Martina M.;Hofemeister, Helmut;Zhang, Youming;Nasmyth, Kim;White, Kevin P.;Dietzel, Steffen;Mechtler, Karl;Durbin, Richard;Stewart, A. Francis;Peters, Jan-Michael;Buchholz, Frank;Hyman, Anthony A.
基因组序列的解释需要可靠和标准化的方法来高通量地评估蛋白质功能。在这里，我们描述了一个快速可靠的管道，研究蛋白质功能的哺乳动物细胞的基础上蛋白质标签在细菌人工染色体（BAC）。BAC转基因的大尺寸确保了大多数（如果不是全部）调节元件的存在，并导致与内源基因的表达紧密匹配的表达。我们表明，BAC转基因可以快速，可靠地产生使用96孔格式重组。在将这些转基因稳定转染到人组织培养细胞或小鼠胚胎干细胞中后，使用通用的基于标签的测定研究标记蛋白的定位、蛋白质-蛋白质和/或蛋白质-DNA相互作用。同样的高通量方法通常也适用于其他模型系统。
The interpretation of genome sequences requires reliable and standardized methods to assess protein function at high throughput. Here we describe a fast and reliable pipeline to study protein function in mammalian cells based on protein tagging in bacterial artificial chromosomes (BACs). The large size of the BAC transgenes ensures the presence of most, if not all, regulatory elements and results in expression that closely matches that of the endogenous gene. We show that BAC transgenes can be rapidly and reliably generated using 96-well-format recombineering. After stable transfection of these transgenes into human tissue culture cells or mouse embryonic stem cells, the localization, protein-protein and/or protein-DNA interactions of the tagged protein are studied using generic, tag-based assays. The same high-throughput approach will be generally applicable to other model systems.
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DOI：
10.1073/pnas.0409861102
发表时间：
2005-02-15
影响因子：
11.1
作者：
Kittler, R;Pelletier, L;Buchholz, F
通讯作者：
Buchholz, F
影响因子：
21.3
作者：
Kittler, Ralf;Pelletier, Laurence;Buchholz, Frank
通讯作者：
Buchholz, Frank
影响因子：
14.9
作者：
Muyrers, JPP;Zhang, YM;Stewart, AF
通讯作者：
Stewart, AF
影响因子：
64.8
作者：
Gavin, AC;Bösche, M;Superti-Furga, G
通讯作者：
Superti-Furga, G
影响因子：
64.8
作者：
Gavin, AC;Aloy, P;Superti-Furga, G
通讯作者：
Superti-Furga, G