Role for Wnt Signaling in Retinal Neuropil Development: Analysis via RNA-Seq and In Vivo Somatic CRISPR Mutagenesis.
Role for Wnt Signaling in Retinal Neuropil Development: Analysis via RNA-Seq and In Vivo Somatic CRISPR Mutagenesis.
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DOI：
10.1016/j.neuron.2018.03.004
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发表时间：
2018-04-04
期刊：
影响因子：
16.2
通讯作者：
Zipursky SL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sarin S;Zuniga-Sanchez E;Kurmangaliyev YZ;Cousins H;Patel M;Hernandez J;Zhang KX;Samuel MA;Morey M;Sanes JR;Zipursky SL
在哺乳动物中协调神经回路形成的基因的筛选一直受到种系突变的实际限制的阻碍。为了克服这些限制，我们将 RNAseq 与体细胞 CRISPR 诱变相结合来研究小鼠视网膜中的突触发育。这里突触发生在细胞层之间，形成两个多层神经纤维。外神经纤维，即外丛状层（OPL），包含分别由杆状和锥状双极树突上的杆状和锥状光感受器轴突形成的突触。我们使用 RNAseq 来鉴定编码细胞表面和分泌蛋白的选择性表达基因，并使用带有细胞特异性启动子的 CRISPR-Cas9 电穿孔来评估它们在 OPL 发育中的作用。以这种方式鉴定的基因包括 Wnt5a 和 Wnt5b。它们由视杆细胞双极产生，并激活视杆细胞中的非规范信号通路来调节早期 OPL 模式。我们在这里使用的方法可以应用于大脑的其他部分。光感受器在视网膜的中间神经元上形成突触。沙林等人。使用 RNAseq 和体细胞 CRISPR/Cas9 诱变来寻找该过程所需的基因。他们表明，双极中间神经元产生的 Wnt5 作用于杆状光感受器来调节突触位置。
Screens for genes that orchestrate neural circuit formation in mammals have been hindered by practical constraints of germ-line mutagenesis. To overcome these limitations, we combined RNAseq with somatic CRISPR mutagenesis to study synapse development in the mouse retina. Here synapses occur between cellular layers, forming two multilayered neuropils. The outer neuropil, the outer plexiform layer (OPL), contains synapses made by rod and cone photoreceptor axons on rod and cone bipolar dendrites, respectively. We used RNAseq to identify selectively expressed genes encoding cell surface and secreted proteins and CRISPR-Cas9 electroporation with cell-specific promoters to assess their roles in OPL development. Among the genes identified in this way are Wnt5a and Wnt5b. They are produced by rod bipolars and activate a non-canonical signaling pathway in rods to regulate early OPL patterning. The approach we use here can be applied to other parts of the brain. Photoreceptors form synapses on interneurons in the retina. Sarin et al. used RNAseq and somatic CRISPR/Cas9 mutagenesis to seek genes required for this process. They show that Wnt5 produced by bipolar interneurons acts on rod photoreceptors to regulate synapse location.
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DOI：
10.1177/1073858415610541
发表时间：
2016-12
期刊：
The Neuroscientist : a review journal bringing neurobiology, neurology and psychiatry
影响因子：
--
作者：
Dong X;You Y;Wu JQ
通讯作者：
Wu JQ
影响因子：
7.7
作者：
Behrens, Christian;Schubert, Timm;Berens, Philipp
通讯作者：
Berens, Philipp
影响因子：
3.6
作者：
Dwyer, Noelle D.;Manning, Danielle K.;Beier, David R.
通讯作者：
Beier, David R.
影响因子：
64.5
作者：
DRESCHER, U;KREMOSER, C;BONHOEFFER, F
通讯作者：
BONHOEFFER, F
影响因子：
8.8
作者：
Greene MJ;Kim JS;Seung HS;EyeWirers
通讯作者：
EyeWirers