TIGER: Single-step in vivo genome editing in a non-traditional rodent.
TIGER: Single-step in vivo genome editing in a non-traditional rodent.
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DOI：
10.1016/j.celrep.2023.112980
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发表时间：
2023-08-29
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影响因子：
8.8
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中科院分区：
文献类型：
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作者：
啮齿动物在分类上具有多样性，并进化出了多种特征。然而，对这些特征的机械理解仍然难以捉摸，这主要是因为非传统模型物种的基因组编辑仍然具有挑战性。在这里，我们使用非洲条纹小鼠（Rhabdomys pumilio）描述了 TIGER（啮齿动物体内靶向基因组编辑），这是一种依赖于简单输卵管内注射技术并使用重组腺相关病毒 (rAAV) 作为向怀孕雌性体内输送试剂的唯一载体的方法。我们证明 TIGER 能够高效生成敲除和敲入（高达 3 kb）细胞系。此外，我们设计了双切割修复 rAAV 模板，发现它显着增加了敲入频率和种系传播率。最后，我们表明超大的双切割 rAAV 模板会导致 3.8 kb 的插入。因此，TIGER 是传统离体基因组编辑方法的一种有吸引力的替代方法，并且有潜力扩展到广泛的物种。李等人。开发 TIGER（啮齿动物体内靶向基因组编辑），这是一种单步体内基因组编辑方法。他们使用非洲条纹小鼠（Rhabdomys pumilio）表明，TIGER 能够有效地产生基因敲除和大型基因敲入品系。由于其简单性，TIGER 可以扩展到其他啮齿动物物种。
Rodents are taxonomically diverse and have evolved a variety of traits. A mechanistic understanding of such traits has remained elusive, however, largely because genome editing in non-traditional model species remains challenging. Here, using the African striped mouse (Rhabdomys pumilio), we describe TIGER (targeted in vivo genome editing in rodents), a method that relies on a simple intraoviductal injecting technique and uses recombinant adeno-associated viruses (rAAVs) as the sole vehicle to deliver reagents into pregnant females. We demonstrate that TIGER generates knockout and knockin (up to 3 kb) lines with high efficiency. Moreover, we engineer a double-cleaving repair rAAV template and find that it significantly increases knockin frequency and germline transmission rates. Lastly, we show that an oversized double-cleaving rAAV template leads to an insertion of 3.8 kb. Thus, TIGER constitutes an attractive alternative to traditional ex vivo genome-editing methods and has the potential to be extended to a broad range of species. Li et al. develop TIGER (targeted in vivo genome editing in rodents), a single-step in vivo genome-editing method. Using African striped mice (Rhabdomys pumilio), they show that TIGER generates knockout and large knockin lines with efficiency. Due to its simplicity, TIGER can potentially be extended to other rodent species.
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