Intra-embryo Gene Cassette Knockin by CRISPR/Cas9-Mediated Genome Editing with Adeno-Associated Viral Vector.
Intra-embryo Gene Cassette Knockin by CRISPR/Cas9-Mediated Genome Editing with Adeno-Associated Viral Vector.
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DOI：
10.1016/j.isci.2018.10.030
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发表时间：
2018-11-30
期刊：
影响因子：
5.8
通讯作者：
Nakauchi H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mizuno N;Mizutani E;Sato H;Kasai M;Ogawa A;Suchy F;Yamaguchi T;Nakauchi H
利用CRISPR/Cas9进行胚胎内基因组编辑，可以通过非同源末端连接(NHEJ)介导的移码突变或同源定向修复(HDR)介导的点突变轻松地产生基因修饰动物。然而，如果没有昂贵的微操作器，大的修改，如基因替换或基因融合，仍然很难在胚胎中引入。此外，用于胚胎内基因组编辑的微操作技术仅在一小部分动物中建立。为了克服这些问题，我们开发了一种无需显微操作的大片段DNA敲击方法。在本研究中，我们通过腺相关病毒(AAV)在不去除透明带的情况下成功地将敲打蛋白供体DNA转移到受精卵中，并通过电穿孔CRISPR/Cas9核糖核蛋白成功地进行了大片段敲打和整个外显子交换。通过这种方法，我们可以方便地在不同的动物物种中交换大的DNA片段，而不需要进行显微操作。AAV通过完整的透明带感染各种哺乳动物的受精卵AAV载体将大的敲击盒运送到受精卵中而不需要微操作Cas9 RNP电穿孔和供体AAV在遗传学中实现了有效的胚胎内敲击技术
Intra-embryo genome editing by CRISPR/Cas9 enables easy generation of gene-modified animals by non-homologous end joining (NHEJ)-mediated frameshift mutations or homology-directed repair (HDR)-mediated point mutations. However, large modifications, such as gene replacement or gene fusions, are still difficult to introduce in embryos without costly micromanipulators. Moreover, micromanipulation techniques for intra-embryo genome editing have been established in only a small set of animals. To overcome these issues, we developed a method of large-fragment DNA knockin without micromanipulation. In this study, we successfully delivered the knockin donor DNA into zygotes by adeno-associated virus (AAV) without removing the zona pellucida, and we succeeded in both large-DNA fragment knockin and whole exon exchange with electroporation of CRISPR/Cas9 ribonucleoprotein. By this method, we can exchange large DNA fragments conveniently in various animal species without micromanipulation. AAV infects zygotes of various mammals through intact zona pellucida AAV vector delivers large knockin cassettes into zygotes without micromanipulation Cas9 RNP electroporation and donor AAV enable efficient intra-embryo knockin Techniques in Genetics; Genetic Engineering
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影响因子：
64.5
作者：
Yang H;Wang H;Shivalila CS;Cheng AW;Shi L;Jaenisch R
通讯作者：
Jaenisch R
影响因子：
4.4
作者：
Miyasaka Y;Uno Y;Yoshimi K;Kunihiro Y;Yoshimura T;Tanaka T;Ishikubo H;Hiraoka Y;Takemoto N;Tanaka T;Ooguchi Y;Skehel P;Aida T;Takeda J;Mashimo T
通讯作者：
Mashimo T
影响因子：
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作者：
Yoon Y;Wang D;Tai PWL;Riley J;Gao G;Rivera-Pérez JA
通讯作者：
Rivera-Pérez JA
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作者：
Miura H;Quadros RM;Gurumurthy CB;Ohtsuka M
通讯作者：
Ohtsuka M
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作者：
Wu, Zhijian;Yang, Hongyan;Colosi, Peter
通讯作者：
Colosi, Peter