Combined use of AFM and X-ray diffraction to analyze crystals of an engineered, domain-deleted antibody.
Combined use of AFM and X-ray diffraction to analyze crystals of an engineered, domain-deleted antibody.
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结合使用 AFM 和 X 射线衍射来分析工程化、结构域缺失的抗体的晶体。
DOI：
10.1107/s0907444905001216
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发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
McPherson,Alexander
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Larson,StevenB;Kuznetsov,YuG;Day,John;Zhou,Jiashu;Glaser,Scott;Braslawsky,Gary;McPherson,Alexander
缺乏任何链间铰链二硫键的基因工程人源化CH 2结构域缺失的单克隆抗体已在去污剂存在下以适合于X射线衍射分析的形式结晶。晶体从4 M甲酸盐沿着Triton X-100生长，具有P21212空间群对称性，晶胞参数a = 83，B = 224，c = 167 Ω。 晶体的分辨率超过2.8微米。 一个无序的晶体形式的更大的尺寸和更有吸引力的习惯也从4 M甲酸盐生长，但在存在的Anapoe系列的洗涤剂。 初步的X射线数据，结合原子力显微镜图像，是一致的不对称单位组成的两个完整的抗体形成一个圆形的二聚体环。结晶单元，必须包含一个双重轴，是四个抗体（两个二聚体环）的环形组件。二聚体和四聚体之间的竞争进入晶格，沿着一种独特的平面缺陷的包装，可能是负责异常高的缺陷密度和无序的X-射线衍射图案所表现出的第二种晶体形式。描述了一种使用初步去污剂测试装置使显示相分离的蛋白质，特别是完整抗体结晶的方法。
A genetically engineered humanized CH2-domain-deleted monoclonal antibody lacking any interchain-hinge disulfide bonds has been crystallized in the presence of detergent in a form suitable for X-ray diffraction analysis. The crystals were grown from 4 M formate along with Triton X-100 and had P21212 space-group symmetry, with unit-cell parameters a = 83, b = 224, c = 167 Å. The crystals diffract to beyond 2.8 Å resolution. A disordered crystal form of larger size and more attractive habit was also grown from 4 M formate, but in the presence of the Anapoe series of detergents. Preliminary X-ray data, in conjunction with atomic force microscopy images, are consistent with asymmetric units consisting of two intact antibodies forming a circular dimeric ring. The crystallizing unit, which must contain a twofold axis, is a toroidal assembly of four antibodies (two dimeric rings). Competition between dimers and tetramers to enter the lattice, along with a unique kind of planar defect of packing, may be responsible for the unusually high defect density and the disorder of the X-ray diffraction pattern exhibited by the second crystal form. An approach to crystallizing proteins showing phase separation, particularly intact antibodies, that uses a preliminary detergent test set is described.
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