Ultrasensitive multiplexed microRNA quantification on encoded gel microparticles using rolling circle amplification.
Ultrasensitive multiplexed microRNA quantification on encoded gel microparticles using rolling circle amplification.
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DOI：
10.1021/ac201618k
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发表时间：
2011-09-15
影响因子：
7.4
通讯作者：
Doyle, Patrick S.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chapin, Stephen C.;Doyle, Patrick S.
人们对灵活的生物分子分析平台有很大的需求，这些平台可以直接精确地量化复杂生物样品中极低水平的多个靶标。在此，我们展示了编码水凝胶微粒上 microRNA (miRNA) 的多重定量，具有亚飞摩尔级灵敏度和单分子报告分辨率。通用接头序列的滚环扩增 (RCA) 与凝胶嵌入探针上捕获的所有 miRNA 靶标连接，能够使用多个荧光报告基因标记每个靶标，并消除扩增偏差的可能性。利用 RCA 方案实现的高灵敏度和使用凝胶颗粒提供的抗污染性，可直接检测少量未处理的人血清样品中的 miRNA，无需 RNA 提取或目标扩增步骤。这种多功能性对于快速、非侵入性诊断测定的开发具有重要意义。
There is great demand for flexible biomolecule analysis platforms that can precisely quantify very low levels of multiple targets directly in complex biological samples. Herein we demonstrate multiplexed quantification of microRNAs (miRNAs) on encoded hydrogel microparticles with sub-femtomolar sensitivity and single-molecule reporting resolution. Rolling circle amplification (RCA) of a universal adapter sequence that is ligated to all miRNA targets captured on gel-embedded probes provides the ability to label each target with multiple fluorescent reporters and eliminates the possibility of amplification bias. The high degree of sensitivity achieved by the RCA scheme and the resistance to fouling afforded by the use of gel particles are leveraged to directly detect miRNA in small quantities of unprocessed human serum samples without the need for RNA extraction or target-amplification steps. This versatility has powerful implications for the development of rapid, non-invasive diagnostic assays.
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