Determination of trans-arachidonic acid isomers in human blood plasma.
Determination of trans-arachidonic acid isomers in human blood plasma.
复制标题
人血浆中反式花生四烯酸异构体的测定。
DOI：
10.1016/j.ab.2004.04.030
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发表时间：
2004
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Balazy,Michael
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zghibeh,ChazaM;RajGopal,V;Poff,CandaceD;Falck,JR;Balazy,Michael
内源性反式脂肪酸来源于膳食，但最近的研究也表明，脂肪酸的顺反异构化是可能的二氧化氮自由基，NO和亚硝酸盐氧化的产物。采用同位素稀释气相色谱/质谱（GC/MS）联用技术，以氘标记内标物为内标，建立了人血浆中4种反式花生四烯酸（TAA）的定量分析方法。酯化的血浆脂肪酸提取物与五氟苄基（PFB）溴，然后通过高效液相色谱纯化产生了一个相当纯的馏分含有TAA-PFB酯，通过GC/MS分析。部分分离的TAA异构体上获得各种GC柱。保留时间与合成标准品的比较显示，人血浆中存在所有四种TAA异构体。人血浆中TAA的平均浓度为20.2ng/ml。5E-AA +11 E-AA、8 E-AA和14 E-AA的异构体水平分别为12.48±1.28、2.75±0.39和4.99±0.74ng/ml。血浆中TAA的鉴定表明花生四烯酸在体内发生异构化。我们的方法可以区分饮食和NO2-依赖性机制的反式脂肪酸的形成，并将有助于在临床和实验环境中定义的作用，TAA作为体内标志物的硝基氧化应激。
Endogenous trans fatty acids originate from diet, but recent studies also suggest that cis–trans isomerization of fatty acids is possible by nitrogen dioxide radical, a product of NO and nitrite oxidation. We developed a method for quantitative analysis of four trans-arachidonic acids (TAA) in human plasma using isotopic dilution gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) with deuterium-labeled internal standard. Esterification of the plasma fatty acid extract with pentafluorobenzyl (PFB) bromide followed by high-performance liquid chromatography purification yielded a fairly pure fraction containing TAA-PFB esters that was analyzed by GC/MS. Partial separation of the TAA isomers was obtained on various GC columns. Comparison of the retention time with the synthetic standards revealed that all four TAA isomers are present in human plasma. The mean concentration of TAA in human plasma was 20.2ng/ml. The levels of isomers were 12.48±1.28, 2.75±0.39, and 4.99±0.74ng/ml for 5E-AA + 11E-AA, 8E-AA, and 14E-AA, respectively. The identification of TAA in plasma suggests that isomerization of arachidonic acid occurs in vivo. Our method allows distinguishing between the dietary and the NO2-dependent mechanisms of trans fatty acid formation and will be useful in defining the role of TAA as an in vivo marker of nitrooxidative stress in clinical and experimental settings.
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